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關(guān)于《胎兒染色體非整倍體（T21、T18、T13）檢測(cè)試劑盒（高通量測(cè)序法）指導(dǎo)原則》（征求意見(jiàn)稿）公開(kāi)征求意見(jiàn)的通知

各有關(guān)單位：
  根據(jù)我中心2016年度醫(yī)療器械技術(shù)審查指導(dǎo)原則編寫(xiě)的任務(wù)安排，我中心組織編寫(xiě)了《胎兒染色體非整倍體（T21、T18、T13）檢測(cè)試劑盒（高通量測(cè)序法）指導(dǎo)原則》（附件1）。結(jié)合我中心前期資料收集、召開(kāi)的相關(guān)專(zhuān)家咨詢(xún)會(huì)等形成的綜合意見(jiàn)，現(xiàn)已形成征求意見(jiàn)稿，即日起在網(wǎng)上公開(kāi)征求意見(jiàn)（www.cmde.org.cn）。如有意見(jiàn)和建議，請(qǐng)于2016年11月15日前將意見(jiàn)按照附件2要求反饋至我中心審評(píng)六部。

  聯(lián)系方式：
  聯(lián)系人：陳亭亭、解怡
  電話：010-68390658、010-68390655
  電子郵箱：chentt@cmde.org.cn、xieyi@cmde.org.cn
  傳真：010-68390713
  通信地址：北京市西城區(qū)車(chē)公莊大街9號(hào)五棟大樓B3座305室
  郵編：100044

  附件：1.《胎兒染色體非整倍體（T21、T18、T13）檢測(cè)試劑盒（高通量測(cè)序法）指導(dǎo)原則》（征求意見(jiàn)稿）
     2.意見(jiàn)征集表

                           國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局

醫(yī)療器械技術(shù)審評(píng)中心
2016年10月14日

附件1

胎兒染色體非整倍體（T21、T18、T13）檢測(cè)試劑盒（高通量測(cè)序法）技術(shù)審查指導(dǎo)原則（征求意見(jiàn)稿）

 

一、前言

本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊(cè)申請(qǐng)人對(duì)胎兒染色體非整倍體（T21、T18、T13）檢測(cè)試劑盒（高通量測(cè)序法）注冊(cè)申報(bào)資料的準(zhǔn)備及撰寫(xiě)，同時(shí)也為技術(shù)審評(píng)部門(mén)對(duì)注冊(cè)申報(bào)資料的技術(shù)審評(píng)提供參考。

本指導(dǎo)原則是對(duì)該類(lèi)試劑的一般要求，申請(qǐng)人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對(duì)注冊(cè)申報(bào)資料的內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化。如申請(qǐng)人認(rèn)為有必要增加本指導(dǎo)原則未包含的研究?jī)?nèi)容，可自行補(bǔ)充。

本指導(dǎo)原則是對(duì)申請(qǐng)人和審查人員的指導(dǎo)性文件，但不包括注冊(cè)審批所涉及的行政事項(xiàng)，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但需要提供詳細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料，相關(guān)人員應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善，以及科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時(shí)進(jìn)行調(diào)整。

二、適用范圍

(一)臨床背景

胎兒染色體非整倍體（fetal chromosome aneuploidies）中的21三體、18三體、13三體（trisomies 21、18、13，即T21、T18、T13）是臨床上最常見(jiàn)的染色體非整倍體疾病。其對(duì)應(yīng)的分別21-三體綜合征（又稱(chēng)唐氏綜合征，先天愚型或Down綜合征）、18-三體綜合征（又稱(chēng)Edwards綜合征）和13-三體綜合征（又稱(chēng)Patau綜合征），發(fā)病率分別約為1/700、1/6000、1/10000，患兒絕大多數(shù)存在嚴(yán)重智力障礙及器官畸形，生活無(wú)法自理，不僅影響兒童的生命健康和生活質(zhì)量，同時(shí)影響經(jīng)濟(jì)社會(huì)的健康可持續(xù)發(fā)展。

依據(jù)《中華人民共和國(guó)母嬰保健法》，為了保障母親和嬰兒健康，提高出我國(guó)出生人口素質(zhì)，醫(yī)療保健機(jī)構(gòu)應(yīng)當(dāng)為育齡婦女和孕產(chǎn)婦提供孕產(chǎn)期保健服務(wù)。產(chǎn)前篩查和產(chǎn)前診斷即是為避免產(chǎn)生遺傳缺陷患兒提供的有效手段。常規(guī)的產(chǎn)前篩查方法包括：早孕期的超聲與血清學(xué)聯(lián)合篩查和中孕期母體血清學(xué)篩查。中孕期母體血清學(xué)篩查是指通過(guò)中孕期母體血清甲胎蛋白、血清人絨毛膜促性腺激素、血清人絨毛膜促性腺激素游離?亞基、抑制素A和非結(jié)合雌三醇指標(biāo)結(jié)合孕婦的年齡、體重、孕周、病史等進(jìn)行綜合風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，得出胎兒是否罹患相關(guān)三體綜合征或神經(jīng)管缺陷的風(fēng)險(xiǎn)度。篩查結(jié)果為高風(fēng)險(xiǎn)的孕婦經(jīng)建議經(jīng)產(chǎn)前診斷進(jìn)行最終確認(rèn)，由孕婦知情選擇。胎兒染色體異常的產(chǎn)前診斷金標(biāo)準(zhǔn)為介入前產(chǎn)前診斷手術(shù),是指通過(guò)絨毛取材術(shù)/羊膜腔穿刺術(shù)/經(jīng)皮臍血管穿刺術(shù)，取相應(yīng)細(xì)胞采用細(xì)胞生物學(xué)方法對(duì)胎兒染色體進(jìn)行核型分析。

我國(guó)對(duì)以下孕婦均實(shí)行產(chǎn)前診斷：35歲以上的高齡孕婦；產(chǎn)前篩查出來(lái)的胎兒染色體異常高風(fēng)險(xiǎn)的孕婦；曾生育過(guò)染色體病患兒的孕婦；產(chǎn)前B超檢查懷疑胎兒可能有染色體異常的孕婦；夫婦一方為染色體異常攜帶者；醫(yī)師認(rèn)為有必要進(jìn)行產(chǎn)前診斷的其他情形。

（二）高通量測(cè)序法進(jìn)行產(chǎn)前篩查

高通量測(cè)序(High-Throughput Sequencing)是近年來(lái)迅速發(fā)展的測(cè)序技術(shù)，又稱(chēng)做下一代測(cè)序（NGS,Next Generation Sequencing）或大規(guī)模平行測(cè)序（MPSS，massively parallel signature sequencing）。相較于以Sanger測(cè)序?yàn)榇淼牡谝淮鷾y(cè)序技術(shù)，其檢測(cè)通量高，靈敏度高，速度快，隨著近年來(lái)檢測(cè)成本的降低，逐漸由科研轉(zhuǎn)入臨床應(yīng)用研究。但從檢測(cè)的準(zhǔn)確性上說(shuō)，第一代測(cè)序技術(shù)目前仍然是測(cè)序檢測(cè)的金標(biāo)準(zhǔn)。

從全球范圍看，高通量測(cè)序在臨床應(yīng)用最廣的方面為胎兒染色體非整倍體的產(chǎn)前篩查。其原理是：孕婦母體血漿中存在胎兒游離DNA（cffDNA，cell-freefetal DNA）, 長(zhǎng)度約為75bp-250bp，幾乎全部來(lái)源于胎盤(pán)的滋養(yǎng)層細(xì)胞，其濃度和孕周密切相關(guān)并以一定比例（5%-30%）穩(wěn)定存在于母體外周血漿中。取母體血漿提取包含正常母體和胎兒的血漿游離DNA,通過(guò)文庫(kù)構(gòu)建技術(shù)，經(jīng)過(guò)片段擴(kuò)增，最后進(jìn)行上機(jī)測(cè)序，通過(guò)軟件分析數(shù)據(jù)獲得染色體數(shù)目評(píng)價(jià)結(jié)果。當(dāng)對(duì)懷有T21胎兒的母體血漿游離DNA數(shù)據(jù)進(jìn)行分析時(shí)，其21號(hào)染色體游離DNA總數(shù)會(huì)有小比例的升高，通過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)算法區(qū)分這一微小差異來(lái)實(shí)現(xiàn)利用cffDNA進(jìn)行胎兒染色體非整倍體的產(chǎn)前篩查。但高通量測(cè)序法不能對(duì)染色體結(jié)構(gòu)異常進(jìn)行檢測(cè)，不能代替?zhèn)鹘y(tǒng)篩查中的開(kāi)放式神經(jīng)管缺陷篩查等。

  （三）適用范圍

本指導(dǎo)原則所述的高通量測(cè)序法，指的是通過(guò)文庫(kù)構(gòu)建、片段擴(kuò)增進(jìn)而進(jìn)行上機(jī)測(cè)序的第二代高通量測(cè)序方法，不需要進(jìn)行片段擴(kuò)增的第三代、第四代單分子測(cè)序方法在文中并未涉及。但高通量測(cè)序技術(shù)發(fā)展迅速，第三代、第四代單分子測(cè)序方法如果在企業(yè)內(nèi)部參考品設(shè)置、性能評(píng)估或臨床評(píng)價(jià)等處如有適用的方面，可以參照?qǐng)?zhí)行。

適用人群：本指導(dǎo)原則預(yù)期用途為對(duì)孕周12周（包含12周）以上的孕婦進(jìn)行產(chǎn)前篩查，其結(jié)果不能代表對(duì)孕婦懷有三體胎兒的確認(rèn)，產(chǎn)前篩查的結(jié)果必須要經(jīng)過(guò)產(chǎn)前診斷進(jìn)行確認(rèn)。

倫理學(xué)問(wèn)題：終止妊娠應(yīng)在遵守我國(guó)相關(guān)法律法規(guī)和行業(yè)規(guī)定的前提下由醫(yī)師提出建議，由夫妻雙方知情選擇，該項(xiàng)檢測(cè)不得作為終止妊娠的依據(jù)。

三、基本要求

 （一）綜述資料

綜述資料主要包括產(chǎn)品預(yù)期用途、產(chǎn)品描述、有關(guān)生物安全性的說(shuō)明、有關(guān)產(chǎn)品主要研究結(jié)果的總結(jié)和評(píng)價(jià)以及其他等內(nèi)容，其中其他包括同類(lèi)產(chǎn)品在國(guó)內(nèi)外批準(zhǔn)上市的情況，應(yīng)著重從方法學(xué)及檢出限等方面寫(xiě)明擬申報(bào)產(chǎn)品與目前市場(chǎng)上已獲批準(zhǔn)的同類(lèi)產(chǎn)品之間的主要區(qū)別。應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊(cè)管理辦法》（總局令第5號(hào)）和《體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)資料要求及說(shuō)明》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第44號(hào)）的相關(guān)要求。

綜述資料應(yīng)詳細(xì)闡明檢測(cè)原理，可配合圖示并寫(xiě)明一個(gè)完整檢測(cè)配合使用的全部試劑及耗材名稱(chēng)、生產(chǎn)廠家、貨號(hào)或注冊(cè)證書(shū)號(hào)以及詳細(xì)的組成成分。

（二）主要原材料的研究資料

主要原材料的研究資料包括企業(yè)內(nèi)部參考品和完成檢測(cè)所需試劑組成兩部分。

1. 企業(yè)內(nèi)部參考品應(yīng)至少包括：陽(yáng)性參考品、陰性參考品、檢測(cè)限參考品、嵌合體參考品，具體要求如下：

1.1陽(yáng)性參考品：應(yīng)采用T21、T18、T13胎兒DNA片段按一定比例與正常女性血漿混合的模擬樣本，T21、T18、T13胎兒DNA片段可由流產(chǎn)組織或羊水細(xì)胞等來(lái)源制備。

1.2陰性參考品：應(yīng)包括采用染色體數(shù)目正常胎兒DNA片段按一定比例與正常女性血漿混合的模擬樣本，以及采用其他染色體異常胎兒DNA片段按一定比例與正常女性血漿混合的模擬樣本。其他染色體異常的陰性參考品由申請(qǐng)人依據(jù)常見(jiàn)染色體異常項(xiàng)目并根據(jù)對(duì)產(chǎn)品的質(zhì)控要求自行選擇。

1.3檢測(cè)限參考品：應(yīng)采用T21、T18、T13胎兒DNA片段按不同比例梯度與正常女性血漿混合的模擬樣本，如5%、3.5%、2.5%等，建議采用95%（n≥20）的陽(yáng)性檢出率作為最低檢測(cè)限確定的標(biāo)準(zhǔn)。

1.4嵌合體參考品：由申請(qǐng)人按照對(duì)產(chǎn)品的質(zhì)控要求自行設(shè)定模擬T21、T18和T13嵌合體的組成比例，如70%異常，30%正常；30%異常，70%正常等。

申請(qǐng)人應(yīng)詳細(xì)說(shuō)明企業(yè)內(nèi)部參考品的組成、詳細(xì)說(shuō)明制備及檢定方法、胎兒DNA片段濃度確認(rèn)方式和所占比例的選擇依據(jù)。企業(yè)內(nèi)部參考品中各類(lèi)型均應(yīng)設(shè)置多個(gè)重復(fù)。

2. 完成全部檢測(cè)流程所需試劑應(yīng)至少包括：血漿游離DNA提取純化試劑、文庫(kù)構(gòu)建試劑、文庫(kù)定量試劑、測(cè)序試劑、陰、陽(yáng)性質(zhì)控品，以及與之配合使用的測(cè)序芯片和數(shù)據(jù)分析軟件。具體要求如下：

2.1血漿游離DNA提取純化試劑：該試劑分類(lèi)界定為一類(lèi)試劑，無(wú)論申報(bào)產(chǎn)品中包含或是配合使用，申請(qǐng)人均應(yīng)提供該試劑提取純化原理、生產(chǎn)廠家及貨號(hào)或一類(lèi)備案憑證號(hào)，提交詳細(xì)組成成分資料。性能方面需對(duì)該試劑提取的DNA片段準(zhǔn)確性及純度要求，提取效率、重復(fù)性及抗干擾能力進(jìn)行評(píng)估。

2.2文庫(kù)構(gòu)建試劑、文庫(kù)定量試劑、測(cè)序試劑：文庫(kù)構(gòu)建試劑通過(guò)對(duì)片段化的DNA進(jìn)行缺口補(bǔ)平及相應(yīng)部分5’端磷酸化和3’端去磷酸化之后使用連接酶加上用于測(cè)序和分析的標(biāo)簽和接頭，構(gòu)建成可以用來(lái)測(cè)序上機(jī)的標(biāo)準(zhǔn)文庫(kù)；文庫(kù)定量試劑通過(guò)PCR擴(kuò)增及與標(biāo)準(zhǔn)品曲線的比對(duì)，用于定量測(cè)定文庫(kù)濃度，為后續(xù)均一化文庫(kù)進(jìn)行上機(jī)測(cè)序做準(zhǔn)備，同時(shí)能夠評(píng)估文庫(kù)構(gòu)建的質(zhì)量。文庫(kù)定量時(shí)應(yīng)明確對(duì)文庫(kù)質(zhì)量、片段大小及濃度要求，應(yīng)提供分析圖譜，對(duì)其中參數(shù)進(jìn)行解釋說(shuō)明（如是否有雜峰，產(chǎn)生的原因，是否對(duì)最終結(jié)果產(chǎn)生影響等）；測(cè)序試劑用于對(duì)均一化的文庫(kù)進(jìn)行片段擴(kuò)增，通過(guò)基因測(cè)序儀捕捉擴(kuò)增過(guò)程中堿基的變化引起的信號(hào)變化來(lái)達(dá)到讀取序列的目的。

以上三種試劑一般由：相應(yīng)功能的酶（末端修復(fù)酶、DNA連接酶、缺口修復(fù)酶DNA聚合酶等）、核苷酸序列（引物、接頭序列、標(biāo)簽序列、文庫(kù)定量標(biāo)準(zhǔn)品）、緩沖液及dNTP組成。具體要求如下：

2.2.1酶：應(yīng)提交純度、活性和穩(wěn)定性資料，提交功能性試驗(yàn)資料。例如：文庫(kù)構(gòu)建過(guò)程包括但不限于末端修復(fù)酶、DNA連接酶、缺口修復(fù)聚合酶等，所選擇的酶應(yīng)當(dāng)具有末端突出削平、缺口補(bǔ)平、標(biāo)簽或接頭連接、DNA聚合酶活性；

2.2.2核苷酸序列：應(yīng)提交相應(yīng)的序列組成和純度信息，序列準(zhǔn)確度及穩(wěn)定性資料；引物設(shè)計(jì)應(yīng)提交引物設(shè)計(jì)原則及選擇對(duì)比依據(jù)；

2.2.3緩沖液：緩沖液應(yīng)明確詳細(xì)的組成及各鹽濃度選擇對(duì)比的依據(jù)；

2.2.4 dNTP：包括dATP、dGTP、dCTP、dTTP，應(yīng)提交對(duì)純度、濃度、保存穩(wěn)定性等的詳細(xì)驗(yàn)證資料。

2.3陰、陽(yáng)性質(zhì)控品：須能夠監(jiān)控DNA片段提取到最終測(cè)序結(jié)果全過(guò)程，因此應(yīng)當(dāng)由陰、陽(yáng)性（T21、T18和T13）胎兒DNA片段按已知比例與正常女性血漿基質(zhì)混合組成。

2.4測(cè)序芯片：應(yīng)詳細(xì)闡明芯片進(jìn)行片段擴(kuò)增原理及結(jié)構(gòu)，明確使用芯片型號(hào)，并對(duì)同一次測(cè)序芯片上樣的樣本間精密度進(jìn)行評(píng)價(jià)。

2.5數(shù)據(jù)分析軟件：舉例介紹原始數(shù)據(jù)質(zhì)量評(píng)估、數(shù)據(jù)處理和篩選的方法，明確數(shù)據(jù)篩選依據(jù)以及使用的算法。

2.6除上述材料外，還需提交不同原材料對(duì)于最終測(cè)序數(shù)據(jù)質(zhì)量影響的評(píng)估材料。由于各測(cè)序平臺(tái)的技術(shù)側(cè)重點(diǎn)不同，數(shù)據(jù)質(zhì)量評(píng)估的項(xiàng)目可能存在差異，需考慮包括但不限于以下方面：文庫(kù)濃度、文庫(kù)片段大小、單樣本總序列數(shù)（數(shù)據(jù)量）、唯一比對(duì)率、單次檢測(cè)的GC gap（最高GC值與最低GC值的差值）以及錯(cuò)誤率等。

綜上所述，申請(qǐng)人應(yīng)提交主要原材料的篩選依據(jù)及試驗(yàn)資料。如為自制，則應(yīng)提交：制備方法、質(zhì)量要求、質(zhì)量檢測(cè)方法、對(duì)比篩選的試驗(yàn)資料等；如為外購(gòu)，則應(yīng)提交：外購(gòu)證書(shū)、質(zhì)量要求、質(zhì)量檢測(cè)方法、對(duì)比篩選的試驗(yàn)資料等。其中，對(duì)比篩選的試驗(yàn)資料應(yīng)包括篩選過(guò)程中的數(shù)據(jù)、圖譜、對(duì)比圖表等信息。

（三）主要工藝及反應(yīng)體系的研究資料

1. 主要生產(chǎn)工藝：包括配制工作液、半成品檢定、分裝和包裝。配制工作液的各種原材料及其配比應(yīng)符合要求，原材料應(yīng)混合均勻，配制過(guò)程應(yīng)對(duì)關(guān)鍵參數(shù)進(jìn)行有效控制。主要包括主要生產(chǎn)工藝介紹和應(yīng)用流程圖方式表示，后者需標(biāo)明關(guān)鍵工藝質(zhì)控步驟，并詳細(xì)說(shuō)明該步驟的質(zhì)控方法及質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)。

2. 反應(yīng)體系研究：指完成檢測(cè)所涉及到的最佳反應(yīng)條件的確定選擇過(guò)程，包括對(duì)提取純化步驟、游離DNA片段的末端修復(fù)、接頭及標(biāo)簽連接、文庫(kù)定量、片段擴(kuò)增、測(cè)序反應(yīng)的反應(yīng)條件及反應(yīng)體系的選擇確定，涉及到對(duì)樣本類(lèi)型、樣本用量、試劑用量、緩沖體系的選擇、反應(yīng)溫度和時(shí)間條件及檢測(cè)過(guò)程中質(zhì)控方法確定的依據(jù)。重點(diǎn)關(guān)注：酶濃度、引物濃度、dNTP濃度、離子濃度、加樣量及反應(yīng)體積等，加樣量和反應(yīng)體積參考相應(yīng)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，經(jīng)研究驗(yàn)證后確定；片段擴(kuò)增各階段溫度、時(shí)間及循環(huán)數(shù)的研究資料；測(cè)序數(shù)據(jù)質(zhì)量的評(píng)估指標(biāo)等。

此外，還應(yīng)進(jìn)行數(shù)據(jù)量對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響研究和胎兒游離DNA濃度和比例對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響研究。

（四）分析性能評(píng)估資料

申請(qǐng)人應(yīng)提交生產(chǎn)者在產(chǎn)品研制后，在實(shí)際生產(chǎn)條件下連續(xù)生產(chǎn)三批并對(duì)試劑盒進(jìn)行的所有性能驗(yàn)證的研究資料，對(duì)于每項(xiàng)分析性能的評(píng)價(jià)都應(yīng)包括具體研究目的、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、研究方法、可接受標(biāo)準(zhǔn)、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)、統(tǒng)計(jì)方法等詳細(xì)資料。有關(guān)分析性能驗(yàn)證的背景信息也應(yīng)在申報(bào)資料中有所體現(xiàn)，包括實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)（實(shí)驗(yàn)室）、適用儀器、試劑規(guī)格、批號(hào)、臨床樣本來(lái)源（如涉及）等。分析性能評(píng)價(jià)的實(shí)驗(yàn)方法可以參考相關(guān)的美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)批準(zhǔn)指南（CLSI-EP）文件或國(guó)內(nèi)有關(guān)體外診斷產(chǎn)品性能評(píng)估的指導(dǎo)原則進(jìn)行。建議著重對(duì)以下分析性能進(jìn)行研究：

1. 最低檢出限：建議使用國(guó)家參考品進(jìn)行梯度稀釋并多次檢測(cè)，將具有95%陽(yáng)性檢出率的胎兒游離DNA濃度水平作為最低檢出限。

2. 企業(yè)內(nèi)部參考品符合率：用試劑檢測(cè)企業(yè)內(nèi)部參考品的符合情況進(jìn)行評(píng)估。

3. 微缺失微重復(fù)評(píng)價(jià)：申請(qǐng)人應(yīng)采用一定比例的微缺失微重復(fù)胎兒DNA與正常女性血漿混合制備微缺失微重復(fù)評(píng)估模擬樣本，微缺失微重復(fù)模擬樣本的類(lèi)型及數(shù)量由申請(qǐng)人選擇確定，并在產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)中明示。

4. 嵌合體評(píng)價(jià)：申請(qǐng)人應(yīng)采用不同嵌合比例的模擬T21、T18和T13嵌合體樣本對(duì)試劑檢測(cè)嵌合體的能力進(jìn)行評(píng)估，對(duì)不能檢測(cè)到的模擬嵌合體的嵌合比例進(jìn)行確認(rèn)。

5. 精密度：精密度的評(píng)價(jià)方法并無(wú)統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)可依，可根據(jù)不同產(chǎn)品特征或企業(yè)的研究習(xí)慣進(jìn)行，前提是必須保證研究的科學(xué)合理性，具體實(shí)驗(yàn)方法可以參考相關(guān)的美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)批準(zhǔn)指南（CLSI-EP）或國(guó)內(nèi)有關(guān)體外診斷產(chǎn)品性能評(píng)估的文件進(jìn)行。企業(yè)應(yīng)對(duì)每項(xiàng)精密度指標(biāo)的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)做出合理要求，如標(biāo)準(zhǔn)差或變異系數(shù)的范圍等。針對(duì)本類(lèi)產(chǎn)品的精密度評(píng)價(jià)主要包括以下要求：

5.1對(duì)可能影響檢測(cè)精密度的主要變量進(jìn)行驗(yàn)證，除檢測(cè)試劑（包括核酸分離/純化組分）本身的影響外，應(yīng)對(duì)高通量基因測(cè)序儀、操作者、地點(diǎn)等要素進(jìn)行相關(guān)的驗(yàn)證。

5.2合理的精密度評(píng)價(jià)周期，例如：為期至少20天的連續(xù)檢測(cè)，每天至少由2人完成不少于2次的完整檢測(cè)，從而對(duì)批內(nèi)/批間、日內(nèi)/日間以及不同操作者之間的精密度進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。如有條件，申請(qǐng)人應(yīng)選擇不同的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行重復(fù)實(shí)驗(yàn)以對(duì)室間精密度進(jìn)行評(píng)價(jià)。

5.3用于精密度評(píng)價(jià)的模擬樣品和臨床樣本均應(yīng)至少包含3個(gè)水平：陰性樣品、臨界陽(yáng)性樣品、（中或強(qiáng)）陽(yáng)性樣品，并根據(jù)產(chǎn)品特性設(shè)定適當(dāng)?shù)木芏纫?。精密度評(píng)價(jià)中的每一次檢測(cè)均應(yīng)從核酸提取開(kāi)始。

5.4干擾試驗(yàn)：包括內(nèi)源性干擾物質(zhì)和外源性干擾物質(zhì)。應(yīng)針對(duì)可能存在的干擾情況進(jìn)行驗(yàn)證。建議申請(qǐng)人在干擾物質(zhì)的潛在最大濃度(“最差條件”)條件下進(jìn)行評(píng)價(jià)。內(nèi)源性干擾物質(zhì)的評(píng)價(jià)只少應(yīng)包括膽紅素、游離血紅蛋白、甘油三酯。

5.5特異性：主要包括其他常見(jiàn)染色體樣本是否干擾T21、T18和T13陰、陽(yáng)性的檢出能力進(jìn)行評(píng)價(jià)。其他常見(jiàn)染色體樣本類(lèi)型及數(shù)量由申請(qǐng)人選擇確定，并在產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)中明示。

    （五）參考值的確定資料

由于目前胎兒染色體非整倍體T13、T18、T21的陽(yáng)性值測(cè)算存在多種計(jì)算方式，且更好的算法和數(shù)據(jù)處理方式仍在不斷開(kāi)發(fā)中，因此，如申請(qǐng)人選擇了某一算法作為參考值的計(jì)算方式，則應(yīng)詳細(xì)闡述選擇該算法作為依據(jù)的原因（如權(quán)威文獻(xiàn)、行業(yè)共識(shí)等），并詳細(xì)闡述計(jì)算公式和各參數(shù)代表的意義并提交采用一定數(shù)量真實(shí)臨床樣本對(duì)參考值的試驗(yàn)驗(yàn)證資料。

以大樣本常用的Z-值（Z-score）算法來(lái)舉例說(shuō)明：

1. Z-值這個(gè)統(tǒng)計(jì)量反應(yīng)的是當(dāng)前數(shù)值距離平均數(shù)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)距離，Z-值的應(yīng)用條件為大樣本量以及數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布，計(jì)算公式如下，

1.1 chrN z-score fortest sample:所檢測(cè)樣本的Z-值；

1.2 N：為指定的第N染色體；

1.3 %chrNsample：待測(cè)樣品第N條染色體唯一比對(duì)序列數(shù)占常染色體的百分比，通過(guò)高通量測(cè)序后軟件分析獲得；

1.4 Mean%chrNreference：參照樣品第N條染色體比例平均值；

1.5 S.D.%chrNreference：參照樣品第N 條染色體比例的標(biāo)準(zhǔn)偏差。

該公式中，影響唯一比對(duì)序列的因素包括GC含量、覆蓋度等，申請(qǐng)人應(yīng)計(jì)算并統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)覆蓋度是否在正常范圍內(nèi)。參照樣品的數(shù)據(jù)影響Mean%chrNreference，S.D.%chrNreference 以及S.D.%chrNreference，參照樣品的數(shù)量，來(lái)源等均對(duì)其數(shù)據(jù)產(chǎn)生影響，申請(qǐng)人需對(duì)參照樣品的數(shù)據(jù)計(jì)算進(jìn)行詳述，并提供計(jì)算值。

2. 被篩查孕婦所懷胎兒的染色體數(shù)量狀況應(yīng)當(dāng)符合正態(tài)分布圖，即大概率為正常染色體數(shù)量，小概率事件為胎兒染色體非整倍體，如下所示：

 

如圖可以看出，出現(xiàn)在Z-值為正負(fù)3以外的數(shù)值，則有99.9%的可能為陽(yáng)性，因此，通常將Z-值=3定為參考值分界點(diǎn)。Z-值>3則判斷為胎兒染色體非整倍體陽(yáng)性。

鑒于并無(wú)100%陰、陽(yáng)性分界點(diǎn)，申請(qǐng)人應(yīng)將參考值設(shè)定灰區(qū)范圍，灰區(qū)的設(shè)定應(yīng)提交理論和實(shí)際試驗(yàn)結(jié)果的依據(jù)，并在說(shuō)明書(shū)【參考值】和【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】項(xiàng)進(jìn)行解釋說(shuō)明，如是否需要用產(chǎn)前診斷的方式進(jìn)行最終確認(rèn)，可能的原因，是否需要孕齡再大時(shí)進(jìn)行再次抽血復(fù)測(cè)等等。

在參考值設(shè)定后，申請(qǐng)人應(yīng)當(dāng)選取一定數(shù)量陰、陽(yáng)性臨床樣本進(jìn)行試驗(yàn)驗(yàn)證，如與該公式不符，則應(yīng)說(shuō)明出現(xiàn)的問(wèn)題及詳細(xì)的數(shù)據(jù)矯正方式。

（六）穩(wěn)定性研究資料

穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括研究方法的確定依據(jù)、具體的實(shí)施方案、詳細(xì)的研究數(shù)據(jù)以及結(jié)論。主要涉及兩部分內(nèi)容：申報(bào)試劑的穩(wěn)定性和適用樣本的穩(wěn)定性研究。

1. 申報(bào)試劑的穩(wěn)定性研究，主要包括實(shí)時(shí)穩(wěn)定性（有效期）、運(yùn)輸穩(wěn)定性、開(kāi)瓶穩(wěn)定性及凍融次數(shù)限制等研究。對(duì)于實(shí)時(shí)穩(wěn)定性研究，應(yīng)提供至少三批樣品在實(shí)際儲(chǔ)存條件下保存至成品有效期后的研究資料。

2. 適用樣本的穩(wěn)定性研究，主要包括對(duì)含有游離DNA的孕婦血漿的保存、冷藏和冷凍條件下的有效期驗(yàn)證，以及血漿游離DNA提取后儲(chǔ)存條件的驗(yàn)證?？梢栽诤侠淼臏囟确秶鷥?nèi)選擇溫度點(diǎn)（溫度范圍），每間隔一定的時(shí)間段即對(duì)儲(chǔ)存樣本進(jìn)行全性能的分析驗(yàn)證，從而確認(rèn)樣本的效期穩(wěn)定性。適于冷凍保存的樣本還應(yīng)對(duì)凍融次數(shù)進(jìn)行評(píng)價(jià)。

此外，試劑穩(wěn)定性和樣本穩(wěn)定性?xún)刹糠謨?nèi)容的研究結(jié)果均應(yīng)在說(shuō)明書(shū)【儲(chǔ)存條件及有效期】和【樣本要求】?jī)身?xiàng)中進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明。

（七）產(chǎn)品技術(shù)要求

擬定產(chǎn)品技術(shù)要求應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊(cè)管理辦法》（總局令第4號(hào)）、《體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)資料要求及說(shuō)明》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第44號(hào)）和《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫(xiě)指導(dǎo)原則》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第9號(hào)）的相關(guān)要求。該類(lèi)產(chǎn)品作為三類(lèi)體外診斷試劑，應(yīng)將主要原材料、生產(chǎn)工藝及半成品檢定等內(nèi)容作為附錄附于技術(shù)要求正文后，應(yīng)將各種原材料的來(lái)源、特性以及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)等信息的重點(diǎn)內(nèi)容予以明確。

如果擬申報(bào)試劑已有相應(yīng)的國(guó)家/行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)發(fā)布，則企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的要求不得低于上述標(biāo)準(zhǔn)要求。

（八）注冊(cè)檢測(cè)

根據(jù)總局第5號(hào)令要求，首次申請(qǐng)注冊(cè)的第三類(lèi)產(chǎn)品應(yīng)在國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局認(rèn)可的、具有相應(yīng)承檢范圍的醫(yī)療器械檢測(cè)機(jī)構(gòu)進(jìn)行連續(xù)三個(gè)生產(chǎn)批次樣品的注冊(cè)檢測(cè)。該產(chǎn)品已有國(guó)家參考品發(fā)布，在注冊(cè)檢測(cè)時(shí)應(yīng)使用“高通量測(cè)序用外周血胎兒染色體非整倍體（T21、T18和T13）國(guó)家參考品”進(jìn)行

    （九）產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)

產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的格式應(yīng)符合《體外診斷試劑說(shuō)明書(shū)編寫(xiě)指導(dǎo)原則》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第17號(hào)）的要求，境外產(chǎn)品的中文說(shuō)明書(shū)除格式要求外，其內(nèi)容應(yīng)盡量保持與原文說(shuō)明書(shū)的一致性，翻譯力求準(zhǔn)確且符合中文表達(dá)習(xí)慣。產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的所有內(nèi)容均應(yīng)與申請(qǐng)人提交的注冊(cè)申報(bào)資料中的相關(guān)研究結(jié)果保持一致，如某些內(nèi)容引用自參考文獻(xiàn)，則應(yīng)以規(guī)范格式對(duì)此內(nèi)容進(jìn)行標(biāo)注，并單獨(dú)列明參考文獻(xiàn)的相關(guān)信息。

結(jié)合《體外診斷試劑說(shuō)明書(shū)編寫(xiě)指導(dǎo)原則》的要求，下面對(duì)說(shuō)明書(shū)的重點(diǎn)內(nèi)容進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明。

1.【產(chǎn)品名稱(chēng)】

建議按照如下方式命名：胎兒染色體非整倍體（T21、T18、T13）檢測(cè)試劑盒（方法學(xué)）或胎兒染色體非整倍體（T21/T18/T13）檢測(cè)試劑盒（方法學(xué)）。

舉例：胎兒染色體非整倍體（T21、T18、T13）檢測(cè)試劑盒（半導(dǎo)體測(cè)序法）、胎兒染色體非整倍體（T21/T18/T13）檢測(cè)試劑盒（可逆末端終止測(cè)序法）。

2.【預(yù)期用途】

2.1第一自然段：預(yù)期用途描述，包括被測(cè)孕婦孕周特征，樣本類(lèi)型等。

舉例：該產(chǎn)品用于定性檢測(cè)孕周為12-24周的孕婦外周血血漿中胎兒游離脫氧核糖核酸（DNA）,通過(guò)分析樣本中的胎兒游離DNA的21號(hào)、18號(hào)及13號(hào)染色體數(shù)量的差異，對(duì)胎兒染色體非整倍體疾病21-三體綜合征、18-三體綜合征和13-三體綜合征進(jìn)行產(chǎn)前輔助診斷。如試劑盒僅是測(cè)序步驟中的建庫(kù)步驟，則預(yù)期用途應(yīng)描述為“構(gòu)建測(cè)序文庫(kù)”。

2.2第二自然段，按照《體外診斷試劑說(shuō)明書(shū)編寫(xiě)指導(dǎo)原則》進(jìn)行，介紹臨床適應(yīng)癥及背景，說(shuō)明相關(guān)的臨床或?qū)嶒?yàn)室診斷方法等，應(yīng)介紹產(chǎn)前診斷金標(biāo)準(zhǔn)。

2.3明確該產(chǎn)品作為產(chǎn)前篩查用途，其結(jié)果的確認(rèn)要由產(chǎn)前診斷金標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行。

3.【檢驗(yàn)原理】

詳細(xì)說(shuō)明母體胎兒游離DNA判斷染色體數(shù)量的檢測(cè)原理并簡(jiǎn)介方法學(xué)原理（必要時(shí)可用圖示進(jìn)行）。

4.【主要組成成分】

說(shuō)明試劑盒所包含組分的名稱(chēng)、數(shù)量、比例或濃度等信息，說(shuō)明不同批號(hào)試劑盒中各組分是否可以互換。

試劑盒中不包含但該項(xiàng)檢測(cè)必需的組分，說(shuō)明書(shū)中應(yīng)列出相關(guān)試劑/耗材的名稱(chēng)、生產(chǎn)企業(yè)、貨號(hào)、注冊(cè)證號(hào)（如有）及其他相關(guān)信息，測(cè)序芯片應(yīng)明確型號(hào)

5.【儲(chǔ)存條件及有效期】

5.1按照穩(wěn)定性研究資料，說(shuō)明試劑盒的效期穩(wěn)定性、開(kāi)瓶穩(wěn)定性、復(fù)溶穩(wěn)定性、運(yùn)輸穩(wěn)定性、凍融次數(shù)要求等，應(yīng)標(biāo)明具體的儲(chǔ)存條件及效期。

5.2按照《醫(yī)療器械說(shuō)明書(shū)和標(biāo)簽管理規(guī)定》（總局令第5號(hào)）增加生產(chǎn)日期，使用期限或者失效日期。

6.【樣本要求】

6.1樣本采集要求。

6.2說(shuō)明對(duì)采血管及抗凝劑的要求；

6.3樣本保存、運(yùn)輸及處理：孕婦外周血樣本的保存條件（溫度、時(shí)間長(zhǎng)度），運(yùn)輸條件，處理?xiàng)l件（如：多長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)必須分離血漿）；已分離的血漿樣本的保存條件（溫度、時(shí)間長(zhǎng)度），運(yùn)輸條件，處理?xiàng)l件（如：核酸提取前的預(yù)處理）；冷藏/冷凍樣本檢測(cè)前是否需恢復(fù)至室溫，凍融次數(shù)的要求。

上述內(nèi)容需在穩(wěn)定性研究資料中詳述并用產(chǎn)品進(jìn)行性能評(píng)估與驗(yàn)證。

7.【適用機(jī)型】

適用的測(cè)序儀器具體型號(hào)，并提供與儀器有關(guān)的重要信息以指導(dǎo)用戶操作。

8.【檢驗(yàn)方法】

無(wú)論是否包含提取試劑或測(cè)序試劑，申請(qǐng)人應(yīng)從頭詳細(xì)描述完成完整檢測(cè)所需的全部步驟，包括血漿游離DNA的提取、文庫(kù)構(gòu)建、文庫(kù)定量、片段擴(kuò)增及上機(jī)測(cè)序。該類(lèi)產(chǎn)品操作程序較多，作為產(chǎn)品使用說(shuō)明書(shū)該項(xiàng)內(nèi)容應(yīng)當(dāng)盡量詳細(xì)，以能夠指導(dǎo)用戶進(jìn)行操作，其中應(yīng)當(dāng)包括各步驟的注意事項(xiàng)及配合使用物品的技術(shù)參數(shù)、儀器廠家和型號(hào)（如PCR儀，生物分析儀等）和反應(yīng)條件，以半導(dǎo)體測(cè)序?yàn)槔?/span>

8.1 DNA提?。篋NA提取方式，提取試劑盒貨號(hào)或注冊(cè)證號(hào)；DNA提取液的短期和長(zhǎng)期保存方式，凍融次數(shù)等。

8.2文庫(kù)構(gòu)建：末端修復(fù)、接頭連接、缺口修復(fù)、PCR擴(kuò)增；所構(gòu)建的文庫(kù)短期和長(zhǎng)期保存方式，凍融次數(shù)等。

8.3文庫(kù)定量；描述對(duì)于定量后文庫(kù)濃度和質(zhì)量的要求，以及何種情況進(jìn)行文庫(kù)的重新構(gòu)建。

8.4測(cè)序模板的制備：混合文庫(kù)、PCR、模板富集。

8.5上機(jī)測(cè)序：儀器準(zhǔn)備、設(shè)置及儀器使用相關(guān)參數(shù)

9.【參考值】

明確設(shè)定參考區(qū)間所使用的算法及驗(yàn)證參考區(qū)間所使用的樣本例數(shù)及類(lèi)型。如使用軟件，則應(yīng)明確軟件名稱(chēng)、唯一標(biāo)識(shí)號(hào)、生產(chǎn)廠家及醫(yī)療器械注冊(cè)證書(shū)編號(hào)；如暫未拿證，應(yīng)空出相應(yīng)內(nèi)容，在軟件名稱(chēng)后注明（醫(yī)療器械注冊(cè)證書(shū)編號(hào)：）。

10.【檢驗(yàn)方法的局限性】

10.1本試劑盒作為胎兒染色體非整倍體篩查檢測(cè)，其結(jié)果僅供臨床參考，不能作為診斷的唯一依據(jù)。對(duì)患者的臨床診斷應(yīng)采用金標(biāo)準(zhǔn)方法（染色體核型分析）并結(jié)合其癥狀/體征、病史及其他實(shí)驗(yàn)室檢查等情況綜合進(jìn)行。該產(chǎn)品不能對(duì)胎兒染色體結(jié)構(gòu)異常進(jìn)行檢測(cè)。

10.2本試劑盒適用于孕婦外周血血漿樣本檢測(cè)，不適用于其它樣本檢測(cè)。

10.3胎兒游離DNA濃度在孕婦外周血中存在較大個(gè)體差異，變化范圍從2%到30%不等且和孕周密切相關(guān)，因此若因胎兒游離DNA濃度較低造成檢驗(yàn)失敗時(shí)，可待孕周較大時(shí)再次抽血檢測(cè)。

10.4以下幾種情況的孕婦樣品可能會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性或假陰性結(jié)果，需要結(jié)合其他檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行綜合判斷：

10.4.1孕婦本人為染色體非整倍體疾病患者、其他染色體疾病患者或攜帶者；

10.4.2胎兒染色體異常中的平衡易位，嵌合型三體異常會(huì)影響檢測(cè)；

10.4.3懷有雙胎或者多胎（三胎及三胎以上）的孕婦；

10.4.4近期接受過(guò)移植手術(shù)、干細(xì)胞治療；近期接受過(guò)免疫治療或輸注過(guò)異體血制品；

10.4.5孕婦本人為腫瘤患者；

10.4.6通過(guò)體外受精-胚胎移植（IVF-ET）方式受孕的孕婦;

10.4.7體重嚴(yán)重超重的孕婦。

10.5樣本采集、運(yùn)輸及處理不當(dāng)、未按說(shuō)明書(shū)操作均有可能導(dǎo)致假陽(yáng)性或假陰性結(jié)果；描述在樣本采集，保存、運(yùn)輸中需遵循的原則及注意事項(xiàng)，例如：

10.5.1只可使用EDTA抗凝采血管進(jìn)行取樣；

10.5.2顛倒混勻時(shí)動(dòng)作應(yīng)輕柔，防止溶血；

10.5.3全血離體后必須在8小時(shí)內(nèi)進(jìn)行血漿分離；

10.5.4血漿分離過(guò)程中注意不要吸到中間層的白細(xì)胞；

10.5.5血漿樣本反復(fù)凍融次數(shù)應(yīng)不超過(guò)2次；

10.5.6禁止將普通EDTA抗凝樣本和血漿樣本在室溫狀態(tài)下放置；

10.5.7血漿樣本寄送采用干冰運(yùn)輸。

11.【產(chǎn)品性能指標(biāo)】

按照分析性能評(píng)估資料內(nèi)容詳述以下性能指標(biāo)：最低檢出限、企業(yè)內(nèi)部參考品符合率、微缺失微重復(fù)評(píng)價(jià)、嵌合體評(píng)價(jià)、精密度、干擾試驗(yàn)、特異性。各項(xiàng)評(píng)估應(yīng)包括評(píng)估方法、數(shù)據(jù)和結(jié)果。應(yīng)將臨床評(píng)價(jià)的試驗(yàn)結(jié)果納入。包括臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)數(shù)量、樣本例數(shù)、試驗(yàn)結(jié)果等內(nèi)容。

（十）臨床評(píng)價(jià)資料

1．研究方法

對(duì)照方法：依據(jù)衛(wèi)生部（現(xiàn)衛(wèi)計(jì)委）發(fā)布的“《WS322.2-2010胎兒染色體異常與開(kāi)放性神經(jīng)管缺陷的產(chǎn)前篩查與診斷技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)》第2部分:胎兒常見(jiàn)染色體異常的細(xì)胞遺傳學(xué)產(chǎn)前診斷技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)”（以下簡(jiǎn)稱(chēng)《技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)》），以介入性產(chǎn)前診斷手術(shù)結(jié)果（包括絨毛取材術(shù)、羊膜腔穿刺術(shù)和經(jīng)皮臍血管穿刺術(shù)）和出生隨訪結(jié)果作為確診胎兒染色體非整倍體T21、T18、T13的對(duì)照金標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)于出生隨訪，應(yīng)在方案中明確隨訪由新生兒醫(yī)師進(jìn)行，各機(jī)構(gòu)在制定方案中對(duì)醫(yī)師進(jìn)行統(tǒng)一的培訓(xùn)，采用科學(xué)的、統(tǒng)一的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)和評(píng)價(jià)項(xiàng)目（應(yīng)當(dāng)提供依據(jù)）對(duì)出生后嬰兒表觀進(jìn)行是否是三體患兒的診斷，也可采用出生后采血進(jìn)行核型分析的方式進(jìn)行診斷。

研究方法包括前瞻性研究也可納入部分回顧性研究。前瞻性研究是指對(duì)臨床需要正常進(jìn)行產(chǎn)前診斷的孕婦采集樣本與金標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)進(jìn)行對(duì)比分析；回顧性研究是指對(duì)臨床研究單位樣本庫(kù)中已有金標(biāo)準(zhǔn)確認(rèn)的樣本進(jìn)行重新檢測(cè)，其結(jié)果與原金標(biāo)準(zhǔn)結(jié)果進(jìn)行對(duì)比分析。

統(tǒng)計(jì)學(xué)分析一般選用交叉四格表的形式總結(jié)本試劑盒測(cè)序結(jié)果和金標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)結(jié)果并進(jìn)行卡方或kappa檢驗(yàn)，與金標(biāo)準(zhǔn)比對(duì)進(jìn)行敏感性、特異性分析，計(jì)算陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值。對(duì)于以上統(tǒng)計(jì)值，均應(yīng)做統(tǒng)計(jì)假設(shè)，并報(bào)告95%置信區(qū)間。

2. 臨床研究機(jī)構(gòu)及人員

臨床研究機(jī)構(gòu)應(yīng)為已取得產(chǎn)前診斷技術(shù)服務(wù)資質(zhì)的醫(yī)療機(jī)構(gòu)，且為衛(wèi)計(jì)委開(kāi)展高通量基因測(cè)序產(chǎn)前篩查與診斷臨床應(yīng)用試點(diǎn)。人員應(yīng)為經(jīng)過(guò)專(zhuān)門(mén)培訓(xùn)的取得資質(zhì)的人員。機(jī)構(gòu)和人員應(yīng)遵循《產(chǎn)前診斷技術(shù)管理辦法》、《母嬰保健專(zhuān)項(xiàng)技術(shù)服務(wù)許可及人員資格管理辦法》，機(jī)構(gòu)取得《母嬰保健技術(shù)服務(wù)執(zhí)業(yè)許可證》人員取得《母嬰保健技術(shù)考核合格證書(shū)》。

3. 適用人群及樣本量

適用人群為孕齡12周以上（包含12周）的孕婦。樣本量依據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)及胎兒染色體三體發(fā)病率計(jì)算，根據(jù)其臨床預(yù)期用于產(chǎn)前篩查的用途，建議總例數(shù)不少于10000例，除了選擇前瞻性樣本外，也可以包括回顧性樣本。

前瞻性樣本應(yīng)至少為2000例，試驗(yàn)要求能夠篩選出一定數(shù)量的T21陽(yáng)性、至少5例的T18陽(yáng)性、至少1例的T13陽(yáng)性。全部10000例樣本中，T21、T18、T13陽(yáng)性例數(shù)應(yīng)分別符合統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，如其中前瞻性樣本未篩查出符合要求的陽(yáng)性病例數(shù)量，則應(yīng)繼續(xù)增加樣本例數(shù)進(jìn)行篩查。無(wú)論是前瞻性還是回顧性樣本，均應(yīng)可以溯源。

4. 其他要求：

對(duì)于臨床試驗(yàn)中可能會(huì)出現(xiàn)用于核型分析的細(xì)胞培養(yǎng)不出導(dǎo)致金標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)數(shù)據(jù)缺失的情況：

4.1密切關(guān)注該病例并建議孕婦做二次穿刺，最終確定結(jié)果，則可繼續(xù)搜集數(shù)據(jù)納入分析；

4.2核型分析屬于有創(chuàng)檢測(cè)，如孕婦拒絕再次穿刺導(dǎo)致的金標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)失訪，可接受的失訪率應(yīng)控制在≤5%，且失訪數(shù)據(jù)應(yīng)說(shuō)明原因。另外，臨床試驗(yàn)結(jié)果的客觀內(nèi)容（包括失訪率等）建議在產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)中明示。

5. 臨床試驗(yàn)方案

5.1申請(qǐng)人按照上述1-4要求并結(jié)合體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)相關(guān)法規(guī)制定臨床試驗(yàn)方案。需遵循如下要點(diǎn)：

5.1.1各臨床研究機(jī)構(gòu)的方案應(yīng)基本一致，且保證在整個(gè)臨床試驗(yàn)過(guò)程中遵循預(yù)定的方案實(shí)施，不可隨意改動(dòng)。臨床試驗(yàn)方案的修改過(guò)程和版本要記錄在案，且每次改動(dòng)應(yīng)記錄原因。

5.1.2整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程應(yīng)在臨床研究機(jī)構(gòu)的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)并由本實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)人員操作完成，申報(bào)單位的技術(shù)人員除進(jìn)行必要的技術(shù)指導(dǎo)外，不得隨意干涉實(shí)驗(yàn)進(jìn)程，尤其是數(shù)據(jù)收集過(guò)程。如有特殊事項(xiàng)，應(yīng)向國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局醫(yī)療器械注冊(cè)管理司提出申請(qǐng)。

5.2臨床試驗(yàn)方案還應(yīng)詳細(xì)闡述如下內(nèi)容：

5.2.1臨床研究單位選擇、臨床主要研究人員簡(jiǎn)介；對(duì)臨床試驗(yàn)的整體管理情況、質(zhì)量控制，試驗(yàn)人員培訓(xùn)、儀器日常維護(hù)、儀器校準(zhǔn)、質(zhì)控品運(yùn)行的規(guī)定；

5.2.2臨床背景、病例納入/排除標(biāo)準(zhǔn)、樣本的預(yù)期選擇例數(shù)及標(biāo)準(zhǔn)。其中須注意，病例納入/排除標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)嚴(yán)格制定并實(shí)施，任何已經(jīng)入選的病例再被排除出臨床研究都應(yīng)記錄在案并明確說(shuō)明原因。在試驗(yàn)操作過(guò)程中和判定試驗(yàn)結(jié)果時(shí)應(yīng)采用盲法以保證試驗(yàn)結(jié)果的客觀性，對(duì)于編盲的方式應(yīng)有詳細(xì)描述；

5.2.3樣本類(lèi)型，樣本的收集、處理及保存等；

5.2.4數(shù)據(jù)預(yù)處理、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法、統(tǒng)計(jì)軟件、評(píng)價(jià)統(tǒng)計(jì)結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)。

6. 臨床試驗(yàn)報(bào)告：

臨床實(shí)驗(yàn)報(bào)告包括各機(jī)構(gòu)的臨床試驗(yàn)報(bào)告以及臨床總結(jié)報(bào)告。根據(jù)《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號(hào)）的要求，臨床試驗(yàn)報(bào)告應(yīng)該與方案呼應(yīng)并相一致，對(duì)方案執(zhí)行情況及試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行詳述：

6.1樣本例數(shù)（總結(jié)報(bào)告應(yīng)為各機(jī)構(gòu)的樣本例數(shù)、陽(yáng)性檢出例數(shù)等）、孕婦年齡分布情況、建議以列表方式給出具體例數(shù)及百分比。

6.2對(duì)檢測(cè)精密度、質(zhì)控品測(cè)量值的抽查結(jié)果評(píng)估。

6.3具體試驗(yàn)過(guò)程，及試驗(yàn)過(guò)程中需要說(shuō)明的問(wèn)題，研究過(guò)程中是否涉及對(duì)方案的修改。

6.4申報(bào)試劑批號(hào)、有效期及所用機(jī)型等信息，配合使用的試劑、耗材及儀器的廠商信息、貨號(hào)及產(chǎn)品醫(yī)療器械注冊(cè)證書(shū)號(hào)。強(qiáng)調(diào)：臨床試驗(yàn)研究應(yīng)使用與說(shuō)明書(shū)描述一致的配套使用試劑及儀器。

6.5統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：數(shù)據(jù)預(yù)處理、差異數(shù)據(jù)的重新檢測(cè)與否以及最終是否納入數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)、對(duì)異常值或缺失值的處理。另外考慮到對(duì)不同年齡段孕婦樣本的陽(yáng)性檢出率可能存在一定差異，故建議對(duì)不同年齡段孕婦樣本分別進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

6.6討論和結(jié)論：對(duì)總體結(jié)果進(jìn)行總結(jié)性描述并分析試驗(yàn)結(jié)果，對(duì)本次臨床研究有無(wú)特別說(shuō)明，最后得出臨床試驗(yàn)結(jié)論。

6.7病例報(bào)告表應(yīng)包括如下信息：孕婦代碼、年齡、金標(biāo)準(zhǔn)分析具體結(jié)果、該試劑檢測(cè)結(jié)果。其中金標(biāo)準(zhǔn)分析如為核型分析，應(yīng)明確具體結(jié)果；如為出生隨訪，則應(yīng)明確胎兒出生時(shí)間，隨訪時(shí)間，隨訪方式，隨訪結(jié)果。病例報(bào)告表的全部數(shù)據(jù)應(yīng)可溯源。

7.上市后需完成的工作

    上市后需繼續(xù)搜集至少10家臨床機(jī)構(gòu)、總數(shù)不少于10萬(wàn)例臨床使用數(shù)據(jù)作為臨床補(bǔ)充資料在產(chǎn)品下一次延續(xù)注冊(cè)時(shí)提交，并使用該試劑檢測(cè)的全部結(jié)果（包括陰性、陽(yáng)性）與衛(wèi)生主管部門(mén)關(guān)于胎兒染色體產(chǎn)前診斷技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)以羊水穿刺核型分析和出生隨訪結(jié)果作為金標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行對(duì)照。對(duì)于出現(xiàn)在灰區(qū)的樣本（Z值臨界值區(qū)域）應(yīng)進(jìn)行分析總結(jié)。該項(xiàng)臨床資料應(yīng)當(dāng)由出具數(shù)據(jù)各臨床機(jī)構(gòu)主管部門(mén)簽章。此外，申請(qǐng)人還應(yīng)總結(jié)上市期間假陽(yáng)性和假陰性的例數(shù)和并詳細(xì)分析產(chǎn)生原因。

附件2

《胎兒染色體非整倍體（T21、T18、T13）檢測(cè)試劑盒（高通量測(cè)序法）技術(shù)審查指導(dǎo)原則》（征求意見(jiàn)稿）意見(jiàn)征集表

填寫(xiě)要求：征集資料的內(nèi)容包括企業(yè)信息（境內(nèi)生產(chǎn)企業(yè)見(jiàn)表1、境外生產(chǎn)企業(yè)見(jiàn)表2）及意見(jiàn)內(nèi)容（見(jiàn)表3），企業(yè)需按照表3要求反饋意見(jiàn)，并具體闡述提出意見(jiàn)的理由及相應(yīng)的依據(jù)。征集意見(jiàn)信息統(tǒng)一以word文檔通過(guò)電子郵件方式報(bào)送，格式如下：

一、企業(yè)信息（二選一必填）

表1 境內(nèi)企業(yè)

企業(yè)全稱(chēng)
企業(yè)地址
郵編
聯(lián)系人
聯(lián)系電話
電子郵件

表2 境外企業(yè)

企業(yè)全稱(chēng)
國(guó)別
境內(nèi)代理人全稱(chēng)
代理人地址
代理人郵編
代理機(jī)構(gòu)聯(lián)系人
代理機(jī)構(gòu)聯(lián)系電話
代理機(jī)構(gòu)聯(lián)系人電子郵箱

二、意見(jiàn)內(nèi)容

表3 意見(jiàn)內(nèi)容

序號(hào)	章節(jié)及段落	內(nèi)容	修改意見(jiàn)	意見(jiàn)理由
1 （例）	二、適用范圍（一）臨床背景 第一自然段	18-三體綜合征（又稱(chēng)Edwards綜合征）和13-三體綜合征（又稱(chēng)Patau綜合征），發(fā)病率分別約為1/700、1/6000、1/10000	建議將“1/800”修改為“XXX”；	依據(jù)XXX發(fā)布的數(shù)據(jù)
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來(lái)源：CMDE

整理：TACRO