來源： 本文刊登于《中國醫(yī)療器械信息》雜志2015年第9期12-15頁
作者：李小江
單位：廣東省食品藥品監(jiān)督管理局審評認(rèn)證中心 （ 廣東 510000）
內(nèi)容提要：膠體金法定性檢測試劑的技術(shù)審評目前在國內(nèi)沒有統(tǒng)一的執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)。本文從產(chǎn)品技術(shù)要求、產(chǎn)品說明書、臨床評價等方面，對該類試劑的審評工作中的重點(diǎn)問題進(jìn)行分析，以幫助注冊申報人更好地把握產(chǎn)品的技術(shù)要點(diǎn)，有效指導(dǎo)注冊申報工作。
關(guān) 鍵 詞： 體外診斷試劑 膠體金法 技術(shù)審評要點(diǎn)
0、前言
膠體金試劑由于其快速、便捷、不需特殊設(shè)備、結(jié)果判斷直觀使其在醫(yī)學(xué)檢驗領(lǐng)域得到了迅猛的發(fā)展，特別是在床旁診斷和家庭使用中發(fā)揮著越來越重要的作用。該類產(chǎn)品生產(chǎn)廠家眾多，大小參差不齊，產(chǎn)品質(zhì)量水平差距也較大。該類產(chǎn)品審評目前在國內(nèi)沒有統(tǒng)一的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)和相關(guān)指南，下面結(jié)合筆者多年的審評經(jīng)驗對審評中的重點(diǎn)問題進(jìn)行分析。
1、適用范圍
本文所述適用于依據(jù)《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5 號）（以下簡稱《辦法》）管理類別為Ⅱ類的、基于抗原抗體反應(yīng)原理的膠體金免疫層析法進(jìn)行定性檢測的體外診斷試劑（盒）。其中所述“定性”是指只給出陰性或陽性（有反應(yīng)或無反應(yīng)、是或非、有或無、正常或異常）兩種可能的結(jié)果。至于定量、半定量檢測試劑（盒）不在本文討論范圍之內(nèi)。
2、產(chǎn)品技術(shù)要求
產(chǎn)品技術(shù)要求應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊管理辦法》和《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》的相關(guān)規(guī)定。試劑（盒）性能指標(biāo)主要包括：外觀、膜條寬度、液體移行速度、最低檢測限（分析靈敏度）、特異性、重復(fù)性、批間差等。檢驗方法中應(yīng)明確說明采用的參考品/ 標(biāo)準(zhǔn)品、樣本制備方法、使用的試劑批次和數(shù)量、試驗次數(shù)、計算方法。下面對幾個關(guān)鍵性能指標(biāo)的關(guān)注點(diǎn)進(jìn)行說明：
2.1 最低檢測限（分析靈敏度）
檢出限是定性檢測試劑( 盒) 的一項關(guān)鍵指標(biāo)，其濃度點(diǎn)的選擇應(yīng)符合臨床實(shí)際診斷意義。為了避免在臨床應(yīng)用時出現(xiàn)過多的“假陽性”結(jié)果，企業(yè)在確定該產(chǎn)品的檢出限時應(yīng)結(jié)合其實(shí)際的臨界值，建議不應(yīng)把兩者濃度差設(shè)定的過大。在評價該項指標(biāo)時，不但要驗證檢出限濃度點(diǎn)的陽性符合率情況，還要驗證陰性參考品的符合情況。如申報產(chǎn)品有相應(yīng)的國家參考品，則企業(yè)內(nèi)部陽性/ 陰性參考品應(yīng)參考國家參考品的項目設(shè)置。在不低于國家參考品要求的前提下，申請人應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品性能驗證的實(shí)際情況自行設(shè)置合理的企業(yè)內(nèi)部參考品。申請人應(yīng)對內(nèi)部陽性/ 陰性參考品的來源、抗體濃度等信息進(jìn)行精確的實(shí)驗驗證，并提交詳細(xì)的驗證資料。
2.2 分析特異性
（1）交叉反應(yīng)
對抗原結(jié)構(gòu)相近或臨床癥狀相似的其他相關(guān)抗體血清進(jìn)行交叉反應(yīng)研究。申請人應(yīng)提交所有用于交叉反應(yīng)驗證的病原體來源、濃度確認(rèn)等信息。
（2）干擾物質(zhì)
對樣本中常見的內(nèi)源性干擾物質(zhì)進(jìn)行檢測，如溶血、高脂、黃疸等，說明樣本的制備方法及干擾實(shí)驗的評價標(biāo)準(zhǔn)，確定可接受的干擾物質(zhì)極限濃度。
2.3 重復(fù)性
檢測重復(fù)性指標(biāo)時建議采用臨界值附近的樣品進(jìn)行多次檢測，然后計算同一份樣品多次檢測的結(jié)果或其精確性。在分析試劑重復(fù)性時，不應(yīng)使用強(qiáng)陽性樣品或明顯陰性的樣品，否則無法客觀地評價其檢測效果。
2.4 批間差
取三個批號的試紙，每個批號抽取相同數(shù)量，按照說明書步驟操作，對重復(fù)性進(jìn)行檢測，三個批號測試條的結(jié)果應(yīng)一致，顯色度均一。
3、產(chǎn)品說明書
3.1 產(chǎn)品名稱
試劑（盒）通用名稱由三部分組成：被測物名稱、用途、方法或原理。例如：人絨毛膜促性腺激素（HCG）檢測試劑（膠體金法）。
3.2 預(yù)期用途
第一段內(nèi)容詳細(xì)說明產(chǎn)品的預(yù)期用途，如試劑（盒）用于體外定性檢測人血清、血漿、全血、尿液等樣本的被測物水平，適用的樣本類型應(yīng)結(jié)合實(shí)際的臨床研究情況進(jìn)行確認(rèn)。
第二段內(nèi)容說明與預(yù)期用途相關(guān)的臨床適應(yīng)癥及背景情況，說明相關(guān)的臨床或?qū)嶒炇以\斷方法等。
3.3 主要組成成分
（1）應(yīng)說明試劑( 盒) 包含組分名稱、數(shù)量、比例或濃度等信息。（2）試劑( 盒) 中不包含但對該項檢測必須的組分，企業(yè)應(yīng)明確其相關(guān)信息。（3）試劑( 盒) 中各組分不同批號間如果可以互換，
應(yīng)明確說明并提交相關(guān)驗證材料。
3.4 儲存條件及有效期
（1）對試劑( 盒) 的效期穩(wěn)定性、開封穩(wěn)定性等信息做詳細(xì)介紹。包括環(huán)境溫濕度、避光條件等。（2）開封后未使用產(chǎn)品允許暴露于空氣中的溫濕度及期限等條件予以明確。（3）不同組分保存條件及有效期不同時，應(yīng)分別說明，產(chǎn)品總有效期以其中最短的為準(zhǔn)。
注：保存條件不應(yīng)有模糊表述，如“常溫”、“室溫”。穩(wěn)定期限建議以月或日為單位。
3.5 樣本要求
重點(diǎn)明確以下內(nèi)容：（1）樣本采集前對患者的要求：如采集時間、采集順序等，是否受臨床癥狀、用藥情況等因素的影響。（2）樣本采集：說明采集方法及樣本類型，如有血漿或全血樣本，應(yīng)注明對抗凝劑的要求。（3）樣本處理及保存：樣本處理方法、保存條件及期限、運(yùn)輸條件等。冷藏/ 冷凍樣本檢測前是否須恢復(fù)室溫、凍融次數(shù)、對儲存樣本的添加劑要求等。（4）已知的干擾物。
3.6 檢驗方法
（1）詳細(xì)說明試驗原理、方法，必要時可采用圖示方法描述。（2）應(yīng)明確試驗環(huán)境溫濕度、測試時間( 如觀察時間、失效時間等)，以及樣本的復(fù)溫要求等試驗過程中的注意事項。不同型號產(chǎn)品，加樣方法如有差異，建議分別以圖示方式描述清楚。
3.7 檢驗結(jié)果的解釋
詳細(xì)描述對檢測結(jié)果的判定( 無效、陰性、陽性等)，建議結(jié)合不同情況加以圖示說明。
3.8 檢驗方法局限性
綜合產(chǎn)品的預(yù)期用途、臨床背景、檢測方法及適用范圍等信息，對可能出現(xiàn)的局限性進(jìn)行相關(guān)說明，舉例如下：
（l）本產(chǎn)品檢測結(jié)果僅供臨床參考，不應(yīng)作為臨床診治的唯一依據(jù)，對患者的臨床管理應(yīng)結(jié)合其癥狀/ 體征、病史、其他實(shí)驗室檢查、治療反應(yīng)等信息綜合考慮。（2）本產(chǎn)品檢測原理為基于抗原抗體反應(yīng)的膠體金免疫層析法，可能會受到一些特殊樣本的影響而導(dǎo)致假陽性結(jié)果。（3）高濃度樣本可能會出現(xiàn)H00K 效應(yīng)而導(dǎo)致假陰性，應(yīng)將其稀釋后再檢測。應(yīng)注明對稀釋液的要求、最佳或最大稀釋比例。（4）建議對申報試劑臨床研究中的病例人群特征進(jìn)行說明，并對適用人群的性別、年齡、地域等特征進(jìn)行明示。
3.9 注意事項
應(yīng)至少包括以下內(nèi)容：（1）本試劑( 盒) 的檢測結(jié)果僅供臨床參考，患者的臨床診治應(yīng)結(jié)合其癥狀/ 體征、病史、其他實(shí)驗室檢查及治療反應(yīng)等情況綜合考慮。（2）由于方法學(xué)或抗體特異性等原因，使用不同生產(chǎn)商的試劑對同一份樣本進(jìn)行檢測可能會得到不同的測試結(jié)果，因此，在病程監(jiān)測過程中，用不同試劑檢測所得結(jié)果不應(yīng)直接相互比較，以免造成錯誤的醫(yī)學(xué)解釋，建議實(shí)驗室在發(fā)給臨床醫(yī)生的檢測報告注明所用試劑特征。（3）樣本：采集時間要求、與用藥的先后順序或用藥后時間間隔等；對所有樣本和反應(yīng)廢棄物都應(yīng)視為傳染源對待。
4、臨床評價資料
生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)按照《體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導(dǎo)原則》及《體外診斷試劑注冊管理辦法》的要求進(jìn)行產(chǎn)品臨床試驗，應(yīng)注意以下要求：
4.1 研究方法
有同類產(chǎn)品上市的一般選擇與已上市的同類產(chǎn)品進(jìn)行臨床研究。對比產(chǎn)品應(yīng)選擇境內(nèi)已批準(zhǔn)上市、臨床普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的同類產(chǎn)品，證明本品與已上市產(chǎn)品等效或優(yōu)于已上市產(chǎn)品。研究對象應(yīng)包括兩組，一組是用對比試劑確定為陽性的異常組，另一組是用對比試劑確定為陰性的對照組。
對于新研制體外診斷試劑而言，選擇適當(dāng)?shù)氖茉囌?，采用試驗用體外診斷試劑與診斷該疾病的“金標(biāo)準(zhǔn)”進(jìn)行盲法同步比較。
4.2 臨床研究單位的選擇
第二類體外診斷試劑申請人應(yīng)當(dāng)選定不少于2 家（含2 家）臨床試驗機(jī)構(gòu)，按照有關(guān)規(guī)定開展臨床試驗，臨床試驗機(jī)構(gòu)應(yīng)獲得國家食品藥品監(jiān)督管理總局資質(zhì)認(rèn)可。
4.3 病例選擇及樣本類型
4.3.1 臨床試驗樣本量的確定：注冊申請人（簡稱 申請人）或/ 臨床研究者應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品臨床使用目的，與該產(chǎn)品相關(guān)疾病的臨床發(fā)生率確定臨床研究的樣本量。在符合指導(dǎo)原則有關(guān)最低樣本量要求的前提下，還應(yīng)符合統(tǒng)計學(xué)要求。
①臨床研究的總樣本數(shù)至少為200 例（新研制體外診斷試劑產(chǎn)品的臨床試驗樣本量要求同第三類產(chǎn)品）。②陽性樣本不少于總樣本的30%。包含陽性、陰性樣本，樣本數(shù)目應(yīng)盡可能原分布，盡可能收集/ 獲取臨界值的樣本，并考慮弱陽性樣本。
4.3.2 應(yīng)明確臨床樣本的采集要求。
①盡可能采用新鮮樣品，避免貯存。②對檢測結(jié)果有明顯干擾作用的樣本，如溶血、脂血、黃疸樣本盡量避免使用。
4.3.3 試驗方案中應(yīng)確定嚴(yán)格的病例或樣本納入/排除標(biāo)準(zhǔn)，任何已經(jīng)入選的病例或樣本再被排除出臨床研究都應(yīng)記錄在案并明確說明原因。
4.4 統(tǒng)計學(xué)分析
對臨床試驗結(jié)果的統(tǒng)計應(yīng)選擇合適的統(tǒng)計方法，如陰/ 陽性符合率、檢測結(jié)果一致性分析等。
對于本類產(chǎn)品對比實(shí)驗的等效性研究，常選擇交叉四格表的形式總結(jié)兩種試劑的定性檢測結(jié)果，對定性結(jié)果進(jìn)行四格表卡方或kappa 檢驗以驗證兩種試劑定性結(jié)果的一致性，統(tǒng)計學(xué)分析應(yīng)可以證明兩種方法的檢測結(jié)果無明顯統(tǒng)計學(xué)差異。在臨床研究方案中應(yīng)明確統(tǒng)計檢驗假設(shè)，即評價考核試劑與參比試劑是否等效的標(biāo)準(zhǔn)。
如直接與臨床金標(biāo)準(zhǔn)比對，則除了進(jìn)行上述統(tǒng)計分析外，還應(yīng)進(jìn)行臨床特異性、敏感性的相關(guān)分析。
4.5 結(jié)果差異樣本的驗證
在數(shù)據(jù)收集過程中，對兩種試劑檢測結(jié)果不一致的樣本，應(yīng)采用“金標(biāo)準(zhǔn)”方法或臨床上普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的第三種同類試劑進(jìn)行復(fù)核，同時結(jié)合患者的臨床病情對差異原因及可能結(jié)果進(jìn)行分析。
5、結(jié)語
膠體金法定性檢測試劑審評的規(guī)范化、標(biāo)準(zhǔn)化，將幫助相關(guān)審評人員更深入地了解該類產(chǎn)品的性能特點(diǎn)，把握技術(shù)審評工作的基本要求和尺度，對產(chǎn)品安全性、有效性作出更全面系統(tǒng)的評價。同時也更有利于指導(dǎo)生產(chǎn)企業(yè)的產(chǎn)品注冊工作，促進(jìn)產(chǎn)品安全有效上市。
來源：中國醫(yī)療器械信息雜志
整理：TACRO
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