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體外診斷試劑產(chǎn)品注冊(cè)技術(shù)審評(píng)報(bào)告
產(chǎn)品中文名稱：人類SDC2基因甲基化檢測(cè)試劑盒（熒光PCR法）
產(chǎn)品管理類別：三類 6840
申請(qǐng)人名稱： 廣州市康立明生物科技有限責(zé)任公司
國家食品藥品監(jiān)督管理總局
醫(yī)療器械技術(shù)審評(píng)中心
基本信息
申請(qǐng)人名稱 廣州市康立明生物科技有限責(zé)任公司
申請(qǐng)人住所廣州市高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)開發(fā)區(qū)科學(xué)城開源大道11號(hào)A2棟第六層
生產(chǎn)地址 廣州市高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)開發(fā)區(qū)科學(xué)城開源大道11號(hào)A2棟第六層、A4棟第五層（505單位）
產(chǎn)品審評(píng)摘要
一、產(chǎn)品概述
（一）產(chǎn)品主要組成成分
表1：試劑盒組成、規(guī)格
具體各組分的主要成分詳見說明書。
（二）產(chǎn)品預(yù)期用途
該產(chǎn)品用于體外定性檢測(cè)人糞便樣本中SDC2基因的甲基化情況。
該產(chǎn)品適用于臨床醫(yī)生建議做腸鏡檢查的患者的輔助診斷，不能作為腫瘤早期診斷或確診的依據(jù)，僅作為輔助診斷供臨床醫(yī)生參考，提供給患者更多一種大腸癌輔助診斷方法的選擇。臨床醫(yī)生應(yīng)結(jié)合患者病情及其他實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)指標(biāo)等因素對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行綜合判斷。
（三）產(chǎn)品包裝規(guī)格
10人份/盒、90人份/盒。
（四）產(chǎn)品檢驗(yàn)原理
該產(chǎn)品主要包含提取轉(zhuǎn)化和熒光PCR兩個(gè)步驟：提取轉(zhuǎn)化步驟是用磁珠捕獲的方法提取人糞便樣本中的SDC2基因和ACTB(β-actin)基因；然后用亞硫酸鹽進(jìn)行轉(zhuǎn)化未發(fā)生甲基化的DNA，發(fā)生甲基化的SDC2基因則不會(huì)被亞硫酸鹽轉(zhuǎn)化。 熒光PCR步驟是通過使用雙重?zé)晒釶CR的方法在同一個(gè)反應(yīng)孔中檢測(cè)甲基化的SDC2基因及ACTB基因保守序列。通過特異性的引物來擴(kuò)增甲基化的SDC2基因，由FAM標(biāo)記的熒光探針報(bào)告擴(kuò)增信號(hào)，甲基化的SDC2基因作為大腸癌診斷的標(biāo)志物；通過設(shè)計(jì)保守區(qū)域的引物來擴(kuò)增ACTB基因，由Texas Red標(biāo)記的熒光探針報(bào)告擴(kuò)增信號(hào)。ACTB基因作為內(nèi)控基因用來評(píng)估樣品DNA是否足量以及樣品DNA質(zhì)量是否合格。試劑盒中提供陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品，在每次檢測(cè)反應(yīng)中都需要同時(shí)檢測(cè)。
二、臨床前研究摘要
（一）主要原材料
1. 主要原材料的選擇該產(chǎn)品的主要原材料包括：DNA捕獲序列、引物、探針、DNA聚合酶和dNTPs，這些原材料均是通過外購的方式獲得。 DNA捕獲序列、引物以及探針均由申請(qǐng)人自行設(shè)計(jì)，由合成公司經(jīng)過合成、修飾和純化后獲得；DNA聚合酶由原材料供應(yīng)商克隆表達(dá)后獲得；dNTPs由供應(yīng)商化學(xué)合成獲得。申請(qǐng)人對(duì)主要原材料進(jìn)行了供應(yīng)商的選擇，通過功能性實(shí)驗(yàn)篩選出合格供應(yīng)商，制定了各主要原材料的技術(shù)要求和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)并經(jīng)檢驗(yàn)合格。
2. 企業(yè)參考品和質(zhì)控品設(shè)置情況企業(yè)參考品分為SDC2陽性參考品、SDC2陰性參考品、SDC2特異性參考品、SDC2靈敏度參考品和SDC2精密度參考品。質(zhì)控品分為陽性質(zhì)控品和陰性質(zhì)控品。 企業(yè)參考品和質(zhì)控品的制備原料為甲基化SDC2基因比率為100%以及甲基化SDC2基因比率為0%的兩株細(xì)胞DNA。兩株細(xì)胞經(jīng)過擴(kuò)大化培養(yǎng)、DNA提取、超聲破碎、濃度測(cè)定和稀釋等過程制備成陰性DNA母液和陽性DNA母液。陰性DNA母液和陽性DNA母液經(jīng)過甲基化特異性PCR以及測(cè)序的方法得到驗(yàn)證。 SDC2陽性參考品有7種，分別命名為SDC2陽性參考品P1～P7。SDC2陽性參考品P1～P3為一定DNA濃度下不同甲基化SDC2基因比率的樣本；SDC2陽性參考品P4～P7為不同DNA濃度的樣本。 SDC2陰性參考品有8種，分別命名為SDC2陰性參考品N1～N8。SDC2陰性參考品N1～N6為一定DNA濃度下分別含有不同干擾物質(zhì)的樣本；SDC2陰性參考品N7為一定DNA濃度下含有低于檢測(cè)靈敏度的甲基化SDC2基因的樣本；SDC2陰性參考品N8為一定DNA濃度下不含甲基化SDC2基因的樣本。 SDC2特異性參考品1種，命名為SDC2特異性參考品T。SDC2特異性參考品T為一定DNA濃度下含有其他甲基化基因的樣本。 SDC2精密度參考品2種，分別為SDC2精密度參考品J1和SDC2精密度參考品J2。SDC2精密度參考品J1為低濃度的樣本，SDC2精密度參考品J2為高濃度的樣本。 SDC2靈敏度參考品為一定DNA濃度的陰性樣本和陽性樣本的混合，其中陽性的比率為1%。 SDC2陰性質(zhì)控品和陽性質(zhì)控品分別為一定濃度的陰性DNA樣本和陽性DNA樣本，用于檢測(cè)過程中試劑和儀器的質(zhì)量控制。此外，每一個(gè)反應(yīng)中均檢測(cè)內(nèi)參基因ACTB，用于結(jié)果的判讀及監(jiān)測(cè)樣本的質(zhì)量。
（二）生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系研究
申請(qǐng)人對(duì)試劑盒反應(yīng)體系的研究中包括DNA捕獲序列的組合、裂解條件的選擇、MgCl2濃度的確定、dNTPs濃度的確定、引物探針濃度的確定、DNA聚合酶濃度的確定以及陰/陽性質(zhì)控品濃度等；對(duì)PCR過程中的循環(huán)數(shù)、退火溫度及退火時(shí)間進(jìn)行研究；完成樣本的用量以及樣本保存時(shí)間的研究；對(duì)該產(chǎn)品適配的兩種儀器Roche LightCycler 480 II以及ABI 7500的檢測(cè)結(jié)果的判讀的方式和閾值進(jìn)行了研究。通過功能性實(shí)驗(yàn)，最終確定了最佳的反應(yīng)體系。申請(qǐng)人根據(jù)試劑盒中試劑及組件的主要生產(chǎn)工藝的研究結(jié)果，確定了最佳的生產(chǎn)工藝。
（三）分析性能評(píng)估
分析性能評(píng)估包括試劑盒外觀、靈敏度、特異性、陰/陽性符合率、精密度以及干擾試驗(yàn)的研究。在試劑盒外觀的研究中，選擇連續(xù)生產(chǎn)的三批次試劑盒，主要針對(duì)試劑盒組分是否齊全，包裝外觀清潔、無泄露、無破損，標(biāo)志、標(biāo)簽字跡清楚等情況進(jìn)行目視觀察。結(jié)果顯示試劑盒外觀符合質(zhì)量的要求。靈敏度研究的目的是考察在一定量的野生型的DNA背景下能夠檢測(cè)的陽性樣本最低的比例。分析方法是將2ng/μL的陰/陽性細(xì)胞株基因組DNA按照6個(gè)梯度的方式將兩種細(xì)胞株基因組DNA混勻。使用兩種規(guī)格（10人份/盒、90人份/盒）六批次試劑盒分別在兩種適配的儀器上進(jìn)行檢測(cè)，確定試劑盒檢測(cè)的靈敏度。該靈敏度的研究也同時(shí)在糞便樣本為基質(zhì)的樣本中完成檢測(cè)。檢測(cè)結(jié)果顯示該產(chǎn)品在DNA濃度為2ng/μL的野生型DNA背景下的靈敏度為1%。 特異性研究的方法是分別選取7例經(jīng)過臨床腸鏡確診為正常人的糞便樣本，選取2例其他基因（BMP3）甲基化的DNA樣本，選取SDC2特異性參考品T，使用兩種規(guī)格（10人份/盒、90人份/盒）六批次試劑盒分別在兩種適配的儀器上進(jìn)行檢測(cè)。檢測(cè)結(jié)果均為甲基化SDC2基因擴(kuò)增為陰性，說明該產(chǎn)品能夠?qū)崿F(xiàn)對(duì)甲基化SDC2基因的特異性檢測(cè)。陰/陽性符合率的研究，陰性符合率中需檢測(cè)的樣本類型為包括含有不同類型的可能干擾實(shí)驗(yàn)檢測(cè)的常用藥物的樣本、不含有干擾藥物的樣本、含有低于該產(chǎn)品靈敏度的甲基化樣本；陽性符合率的檢測(cè)樣本包括固定DNA含量一定且含不同的甲基化陽性DNA比率的樣本、不同的DNA濃度梯度的樣本。使用兩種規(guī)格（10人份/盒、90人份/盒）六批次試劑盒分別在兩種適配的儀器上進(jìn)行檢測(cè)。檢測(cè)結(jié)果的顯示陰性符合率為100%；陽性符合率為100%。 精密度的研究分別選擇低DNA濃度及高DNA濃度的精密度參考品J1和精密度參考品J2。使用兩種規(guī)格（10人份/盒、90人份/盒）六批次試劑盒分別在兩種適配的儀器上由兩位實(shí)驗(yàn)人員在20天進(jìn)行連續(xù)的檢測(cè)。檢測(cè)結(jié)果顯示兩種規(guī)格的試劑盒在兩種適配儀器上的變異系數(shù)均小于等于5%。在干擾試驗(yàn)中，選擇潛在的干擾物進(jìn)行研究，包括常用乳液、面霜及女性常用非處方產(chǎn)品，糞便軟化劑、抗腹瀉及瀉藥產(chǎn)品，抗酸及其他胃藥，抗炎癥類藥、止痛藥，動(dòng)植物DNA，脂肪酸和油脂類物質(zhì)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示動(dòng)物DNA（500ng/ml）、植物組織（500ng/ml）、植物油（10μl/ml）、通便類藥物甘露醇（75mg/ml）、通便靈膠囊（7.25mg/ml）、痔瘡膏（24.75mg/ml）、嗎丁啉（0.14mg/ml）、四環(huán)素（10.65mg/ml）、青霉素（2.56mg/ml）、布洛芬膠囊75μg/ml、胃藥斯達(dá)舒（6.84mg/ml）、奧美拉唑（2.82mg/ml）、頭孢克肟（20.5mg/ml）、鹽酸左氧氟沙星（0.15mg/ml）、西咪替丁（2mg/ml）、感冒靈膠囊（0.27mg/ml）對(duì)檢測(cè)結(jié)果無影響。濃度為3倍正常代謝量（9.23mg/ml）的黃連素對(duì)該產(chǎn)品的檢測(cè)影響超出允許標(biāo)準(zhǔn)。因此，建議該產(chǎn)品在臨床使用中，受檢者在本檢測(cè)取樣前1天避免服用黃連素。
（四）陽性判斷值
該產(chǎn)品陽性判斷值的研究采用臨床來源糞便樣本。465例中結(jié)直腸癌患者120例、腺瘤（≥10mm）76例、腸息肉樣本（＜10mm）31例、腸炎樣本24例、胃炎樣本6例、胃癌樣本18例、胃息肉樣本1例，神經(jīng)內(nèi)分泌瘤樣本3例、肝癌和腸道脂肪瘤樣本各1例、正常人184例。試驗(yàn)結(jié)果顯示ACTB基因的Ct值在22至40之間，取95%分位值，Ct值≤36時(shí)判定為樣本合格。在確定樣本質(zhì)量合格的情況下，根據(jù)臨床對(duì)于檢測(cè)靈敏度和特異性的需求分析，判定檢測(cè)樣本SDC2基因Ct值≤38時(shí)判斷為陽性；SDC2基因Ct值＞38時(shí)判斷為陰性。因此，該產(chǎn)品的陽性判斷值為： ACTB基因的Ct值≤36，甲基化SDC2基因Ct值≤38時(shí)判斷樣本為陽性； ACTB基因的Ct值≤36，甲基化SDC2基因Ct值＞38時(shí)判定為陰性樣本； ACTB基因Ct值＞36或者無Ct值時(shí)，判定為樣本不合格。
（五）穩(wěn)定性
申請(qǐng)人對(duì)該產(chǎn)品的穩(wěn)定性的研究包括貨架效期穩(wěn)定性、開封穩(wěn)定性、反復(fù)凍融穩(wěn)定性、運(yùn)輸穩(wěn)定性以及熱穩(wěn)定性。貨架效期穩(wěn)定性：選擇三批次試劑盒，定期對(duì)規(guī)定儲(chǔ)存條件下保存的試劑盒進(jìn)行檢測(cè)，驗(yàn)證其貨架效期穩(wěn)定性；并記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果和日期，形成報(bào)告。其三批次的貨架效期穩(wěn)定性項(xiàng)目的檢測(cè)頻次分別為如下所述： SD11611001：自生產(chǎn)之日起在第一個(gè)月、第三個(gè)月、第四個(gè)月檢之后每個(gè)月檢測(cè)一次直至第14個(gè)月，研究測(cè)試劑盒的貨架效期穩(wěn)定性； SD11612001：自生產(chǎn)之日起每月檢測(cè)一次直至第14個(gè)月，研究試劑盒的貨架效期穩(wěn)定性。 SD11612002：自生產(chǎn)之日起每月檢測(cè)一次直至第14個(gè)月，研究試劑盒的貨架效期穩(wěn)定性。 對(duì)各項(xiàng)參考品及陰/陽性質(zhì)控品檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：該產(chǎn)品在生產(chǎn)后14個(gè)月的產(chǎn)品性能滿足質(zhì)量的要求，試劑性能穩(wěn)定。產(chǎn)品有效期可達(dá)12個(gè)月。 開封穩(wěn)定性：取一定量的效期內(nèi)三批次試劑盒，開封使用狀態(tài)下放置1天、2天、1周后檢測(cè)試劑盒的穩(wěn)定性。對(duì)各項(xiàng)參考品及陰/陽性質(zhì)控品檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明該產(chǎn)品開封使用狀態(tài)下放置1天、2天和1周后，其檢測(cè)結(jié)果顯示試劑盒的產(chǎn)品性能均能夠滿足質(zhì)量的要求，因此該產(chǎn)品在開封使用條件下存放時(shí)間可以達(dá)到1周。 反復(fù)凍融穩(wěn)定性：使用三批次試劑盒在規(guī)定的儲(chǔ)存條件下，取出試劑盒III反復(fù)凍融4次，檢測(cè)每次凍融后的試劑盒的穩(wěn)定性；將試劑盒III放置在冰箱4℃解凍后放回-20℃±5℃保存，反復(fù)凍融4次，每次凍融檢測(cè)1次。對(duì)各項(xiàng)參考品及陰/陽性質(zhì)控品檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明試劑盒III在反復(fù)凍融4次的條件下的產(chǎn)品性能均能夠滿足質(zhì)量的要求。因此聲稱試劑盒III反復(fù)凍融不超過4次。 運(yùn)輸穩(wěn)定性：使用三批次試劑盒進(jìn)行冷鏈運(yùn)輸；對(duì)運(yùn)輸后及運(yùn)輸后放置到有效期末的試劑盒進(jìn)行檢測(cè)。對(duì)各項(xiàng)參考品及陰/陽性質(zhì)控品檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明該產(chǎn)品在冷鏈運(yùn)輸?shù)臈l件下運(yùn)輸6天以及在效期末的檢測(cè)結(jié)果的各項(xiàng)性能指標(biāo)均能夠滿足質(zhì)量的要求。試劑盒的運(yùn)輸時(shí)間在6天內(nèi)不影響產(chǎn)品質(zhì)量。 熱穩(wěn)定性：將三批次試劑盒放置在37℃的鼓風(fēng)烘箱中，每天檢測(cè)一次，連續(xù)三天檢測(cè)。對(duì)各項(xiàng)參考品及陰/陽性質(zhì)控品檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明三批次試劑盒37℃放置3天的測(cè)試結(jié)果在外觀性狀、陰/陽性符合率、靈敏度、特異性、精密度都滿足質(zhì)量要求。申請(qǐng)人對(duì)糞便樣本保存穩(wěn)定性以及該產(chǎn)品提取的DNA樣本的保存穩(wěn)定性進(jìn)行研究。結(jié)果顯示糞便樣本保存時(shí)間期限可達(dá)8個(gè)月；該產(chǎn)品提取的DNA樣本保存時(shí)間可達(dá)1個(gè)月。
三、臨床評(píng)價(jià)摘要
申請(qǐng)人在中山大學(xué)附屬第六醫(yī)院、南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院和山東省腫瘤醫(yī)院共3家臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)完成了臨床試驗(yàn)。
采用腸鏡（和）或病理的等臨床診斷結(jié)果為對(duì)照方法，通過與臨床參考方法對(duì)比驗(yàn)證考核試劑的有效性和安全性，從而評(píng)估考核產(chǎn)品的臨床性能。通過采用單盲、對(duì)照的試驗(yàn)設(shè)計(jì)共篩選入了1381例受試者，有效病例數(shù)為1213例。其中結(jié)直腸癌病例374例，非結(jié)直腸癌病例839例。結(jié)直腸癌病例涵蓋了結(jié)直腸癌不同分期的患者，占總?cè)虢M病例數(shù)的30.83%（374/1213）。非結(jié)直腸癌病例包括干擾人群樣本共551例，其中含437例腸道相關(guān)良性疾病人群樣本（主要包括結(jié)直腸腺瘤110例、結(jié)直腸息肉114例、結(jié)直腸炎癥151例、痔瘡47例以及憩室、腫物、大腸黑變病、脂肪瘤等）、59例消化道炎癥或腫瘤人群樣本（主要包括胃癌18例、食管癌12例、胃炎11例、食管炎8例以及肝癌、膽管癌、闌尾惡性腫瘤、胰腺癌、喉鱗癌、十二指腸癌等）、55例其它腫瘤樣本或疾病人群樣本（主要包括黑色素瘤2例、神經(jīng)內(nèi)分泌癌5例、乳腺癌4例、微生物消化道感染10例、宮頸癌1例、肺癌6例、肺鱗癌8例、前列腺癌10例、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎8例以及宮頸鱗癌1例）。另外入組288例腸道正常人群樣本。 將1213例有效病例對(duì)照方法結(jié)果與考核試劑檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較，檢測(cè)結(jié)果如下表所示：
表2：對(duì)照方法與考核試劑檢測(cè)結(jié)果統(tǒng)計(jì)四格表
臨床試驗(yàn)結(jié)果顯示，1213例有效病例中，有77例樣本考評(píng)試劑盒檢測(cè)結(jié)果與對(duì)照方法不符，其中假陽性18例（主要集中在腸道相關(guān)良性疾病病例，包括息肉6例、腸炎3例、重度異型增生2例以及腺瘤、胃炎等），假陰性59例。對(duì)1213例有效病例進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果表明考核試劑對(duì)結(jié)直腸癌樣本的檢測(cè)敏感性為84.22%（315/374），特異性為97.85%（821/839），總符合率為93.65%（1136/1213），Kappa值為0.85。對(duì)三家臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)入組的374例不同分期結(jié)直腸癌患者結(jié)果分別進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，結(jié)果見下表：
表3：大腸癌臨床分期樣本檢測(cè)結(jié)果
由結(jié)果可見，在結(jié)直腸癌的不同分期，該指標(biāo)的檢出無顯著差異。
對(duì)77例考核試劑與對(duì)照方法不符的樣本和31例臨床試驗(yàn)中與對(duì)照方法符合的樣本（包括腸癌、腸道未見異常、腸炎、痔瘡、息肉、胃癌、食管癌、神經(jīng)內(nèi)分泌癌、前列腺癌、肝癌、肺癌和類分濕性關(guān)節(jié)炎樣本，覆蓋了入組臨床試驗(yàn)的各主要樣本病例類型）進(jìn)行測(cè)序，結(jié)果顯示測(cè)序結(jié)果與試劑盒檢測(cè)結(jié)果一致性為100%，說明該產(chǎn)品能夠?qū)崿F(xiàn)對(duì)SDC2基因甲基化的特異性的檢測(cè)。 在臨床試驗(yàn)中還對(duì)40例結(jié)直腸癌切除根治術(shù)前、后的受試者進(jìn)行了短期隨訪。使用考核試劑對(duì)符合短期隨訪要求的受試者糞便樣本進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果顯示39例檢測(cè)全為術(shù)前與病理結(jié)果相符，術(shù)后陰性與結(jié)直腸癌手術(shù)后的結(jié)果相符。其中有1例考核試劑檢測(cè)結(jié)果為樣本不合格。
綜上所述，考核試劑臨床試驗(yàn)對(duì)該產(chǎn)品的臨床性能進(jìn)行了較全面研究，臨床試驗(yàn)符合要求。
四、風(fēng)險(xiǎn)分析及說明書提示
根據(jù)“YY/T 0316-2016 醫(yī)療器械風(fēng)險(xiǎn)管理對(duì)醫(yī)療器械產(chǎn)品的安全風(fēng)險(xiǎn)分析方式，對(duì)人類SDC2基因甲基化檢測(cè)試劑盒（熒光PCR法）進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)分析。
（一）受益評(píng)估
根據(jù)中國癌癥協(xié)會(huì)公布的數(shù)據(jù)：2015年我國大腸癌新發(fā)比例約39萬，死亡約19萬，并且呈現(xiàn)逐年快速上升的勢(shì)頭。目前大腸癌檢測(cè)的金標(biāo)準(zhǔn)為腸鏡檢查，該試劑盒適用于臨床醫(yī)生建議做腸鏡檢查的患者的輔助診斷，不能作為腫瘤早期診斷或確診的依據(jù)，僅作為輔助診斷供臨床醫(yī)生參考，提供給患者更多一種大腸癌輔助診斷方法的選擇。依據(jù)現(xiàn)有臨床試驗(yàn)結(jié)果，對(duì)結(jié)直腸癌的臨床靈敏度為84.22%，特異性為97.85%。
（二） 風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估
該試劑盒已知和可預(yù)見的安全風(fēng)險(xiǎn)主要有以下幾個(gè)方面：
1. 與生物學(xué)危害有關(guān)的安全風(fēng)險(xiǎn)，例如糞便樣本可能存在傳染性物質(zhì)。
2.與環(huán)境有關(guān)的危害，例如試劑盒生產(chǎn)及檢驗(yàn)中的廢液的分類處理問題。
3. 與使用有關(guān)的安全風(fēng)險(xiǎn)，例如使用儀器和試劑時(shí)沒有按照說明書要求進(jìn)行操作。
4. 與運(yùn)輸與儲(chǔ)存有關(guān)的安全風(fēng)險(xiǎn)，例如試劑的運(yùn)輸和儲(chǔ)存超出規(guī)定條件。
5. 與預(yù)期用途有關(guān)的安全風(fēng)險(xiǎn)，例如本產(chǎn)品的檢測(cè)結(jié)果非唯一診斷依據(jù)，醫(yī)生未結(jié)合其他診斷方法進(jìn)行綜合診斷。陽性結(jié)果不能作為確診依據(jù)，陰性結(jié)果也不能作為排除的依據(jù)。 6. 功能性失效引起的安全風(fēng)險(xiǎn)，例如未按取樣要求取樣、樣本不合格等導(dǎo)致的檢驗(yàn)失敗。7. 與生產(chǎn)有關(guān)的安全風(fēng)險(xiǎn)，例如使用未經(jīng)過驗(yàn)證的原材料。 該試劑盒的產(chǎn)品實(shí)現(xiàn)的全生命周期中通過對(duì)環(huán)境的監(jiān)測(cè)、生產(chǎn)的監(jiān)控、原材料及供應(yīng)商的管理、半成品及成品的檢驗(yàn)以及說明書的警示內(nèi)容等方式對(duì)安全風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行控制和降低，剩余風(fēng)險(xiǎn)可以被控制在驗(yàn)收準(zhǔn)則規(guī)定的可接受范圍內(nèi)，同時(shí)沒有帶來新的危害與安全風(fēng)險(xiǎn)。在目前認(rèn)知水平上，認(rèn)為該產(chǎn)品上市帶來的獲益/受益大于風(fēng)險(xiǎn)。
產(chǎn)品說明書中對(duì)于安全風(fēng)險(xiǎn)的提示信息如下：
1. 產(chǎn)品檢測(cè)的樣本為糞便樣本，取樣量在1.5g-10g之間。
2. 患者提供的糞便樣本必須使用廣州市康立明生物科技有限責(zé)任公司生產(chǎn)的糞便采集裝置收集，3天內(nèi)寄送至檢測(cè)機(jī)構(gòu)。
3. 黃連素（9.23mg/ml）對(duì)檢測(cè)結(jié)果有影響，因此患者取樣前1天應(yīng)注意勿服用藥物黃連素。
4. 樣本的收集、存儲(chǔ)以及DNA的提取和亞硫酸鹽的處理需要按照要求進(jìn)行，否則可能影響檢測(cè)結(jié)果導(dǎo)致假陰性和假陽性的發(fā)生。
5. 本檢測(cè)試劑盒檢測(cè)結(jié)果僅供臨床參考不得作為臨床確診的依據(jù)，應(yīng)結(jié)合其他臨床診斷結(jié)果進(jìn)行判定。判定為陽性的患者，建議接受結(jié)腸鏡檢查以便確診；判定為陰性的患者不排除患病的可能；判定為無效結(jié)果的樣本，建議患者重新取樣檢測(cè)。
6. 產(chǎn)品的說明書中同時(shí)描述了相關(guān)注意事項(xiàng)。
綜合評(píng)價(jià)意見
本申報(bào)項(xiàng)目為境內(nèi)第三類醫(yī)療器械產(chǎn)品注冊(cè)，屬于創(chuàng)新審批項(xiàng)目（編號(hào)：201600150）。申請(qǐng)人的注冊(cè)申報(bào)資料符合現(xiàn)行要求，依據(jù)《醫(yī)療器械監(jiān)督管理?xiàng)l例》（國務(wù)院令第680號(hào)）、《體外診斷試劑注冊(cè)管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令2014年第5號(hào)）等相關(guān)醫(yī)療器械法規(guī)與配套規(guī)章，經(jīng)系統(tǒng)評(píng)價(jià)后,建議準(zhǔn)予注冊(cè)。
2018年11月8日
附件
人類SDC2基因甲基化檢測(cè)試劑盒（熒光PCR法）說明書
【產(chǎn)品名稱】 通用名稱：人類SDC2基因甲基化檢測(cè)試劑盒（熒光PCR法）
【包裝規(guī)格】 10人份/盒，90人份/盒。
【預(yù)期用途】 本試劑盒用于體外定性檢測(cè)人糞便樣本中SDC2基因的甲基化情況。
本試劑盒適用于臨床醫(yī)生建議做腸鏡檢查的患者的輔助診斷，不能作為腫瘤早期診斷或確診的依據(jù)，僅作為輔助診斷供臨床醫(yī)生參考，提供給患者更多一種大腸癌輔助診斷方法的選擇。臨床醫(yī)生應(yīng)結(jié)合患者病情及其他實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)指標(biāo)等因素對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行綜合判斷。
DNA異常的高度甲基化與癌癥的發(fā)生發(fā)展相關(guān)，有研究分析了大腸癌患者的癌組織以及癌旁組織的甲基化情況，篩選出具有顯著差異的甲基化SDC2基因[1]。在糞便樣本的SDC2基因甲基化的研究中發(fā)現(xiàn)在特異性為90.9%時(shí)，大腸癌的檢測(cè)敏感性為90.0%[2]。相對(duì)于正常組織，SDC2基因在大腸癌和腺瘤組織中呈現(xiàn)高水平的甲基化現(xiàn)象，并且SDC2基因在大腸癌和腺瘤組織中的表達(dá)也顯著高于正常組織[3]。SDC2基因在大腸癌不同分期中呈現(xiàn)高度的甲基化，這一現(xiàn)象預(yù)示著其作為大腸癌診斷標(biāo)志物具有較高的價(jià)值[1-3]。
【檢驗(yàn)原理】 本試劑盒主要包含提取轉(zhuǎn)化和熒光PCR兩個(gè)步驟：提取轉(zhuǎn)化步驟是用磁珠捕獲的方法提取人糞便樣本中的SDC2基因和ACTB(β-actin)基因；然后用亞硫酸鹽進(jìn)行轉(zhuǎn)化未發(fā)生甲基化的DNA，發(fā)生甲基化的SDC2基因則不會(huì)被亞硫酸鹽轉(zhuǎn)化。 熒光PCR步驟是通過使用雙重?zé)晒釶CR的方法在同一個(gè)反應(yīng)孔中檢測(cè)甲基化的SDC2基因及ACTB基因保守序列。通過特異性的引物來擴(kuò)增甲基化的SDC2基因，由FAM標(biāo)記的熒光探針報(bào)告擴(kuò)增信號(hào)，甲基化的SDC2基因作為大腸癌診斷的標(biāo)志物；通過設(shè)計(jì)保守區(qū)域的引物來擴(kuò)增ACTB基因，由Texas Red標(biāo)記的熒光探針報(bào)告擴(kuò)增信號(hào)。ACTB基因作為內(nèi)控基因用來評(píng)估樣品DNA是否足量以及樣品DNA質(zhì)量是否合格。試劑盒中提供陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品，在每次檢測(cè)反應(yīng)中都需要同時(shí)檢測(cè)。
【主要組成成分】 1. 試劑盒中包含的試劑組份 本試劑盒根據(jù)試劑不同的保存條件要求，分成如下三個(gè)試劑盒：
表1：試劑盒組成、規(guī)格及主要成分
注：不同批號(hào)試劑盒中的各組分不可以互換。
2.產(chǎn)品不包含，需自備的試劑和儀器
儀 器 類：臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、磁力架、移液器（規(guī)格：10μl、100μl、1000μl、5 ml） 試劑耗材類：實(shí)驗(yàn)需要但試劑盒中不包含的有無水乙醇、10 ml離心管、帶濾芯槍頭（規(guī)格：10μl、100μl、1000μl、5 ml）、2 ml離心管、8聯(lián)管或者96孔板、96孔板封口膜及壓膜器。
【儲(chǔ)存條件及有效期】 試劑盒Ⅰ常溫儲(chǔ)存；試劑盒Ⅱ需2℃-8℃密封儲(chǔ)存；試劑盒III 需-20℃±5℃密封儲(chǔ)存。試劑盒有效期為12個(gè)月。 試劑盒Ⅲ反復(fù)凍融不超過4次，打開包裝后1周內(nèi)可在2℃-8℃儲(chǔ)存，長期儲(chǔ)存請(qǐng)放置于-20℃±5℃（建議開封后即分裝）。試劑盒Ⅱ、試劑盒Ⅲ運(yùn)輸過程中需要保持合適溫度，運(yùn)輸時(shí)間不超過6天。
【適用儀器】 Roche LightCycler 480 Ⅱ、ABI 7500。 注意： 1. 使用ABI7500儀器檢測(cè)時(shí)探針模式的設(shè)置，報(bào)告基因：FAM、TexasRed；猝滅基團(tuán)：NONE；參比熒光：NONE。反應(yīng)體積為30μl。 2. 使用RocheLightCycler 480 Ⅱ儀器檢測(cè)時(shí)需要選擇熒光通道：FAM（465-510nm）、Texas Red（533-610nm）。反應(yīng)體積30μl。
【樣本要求】 1. 檢測(cè)樣本類型：糞便樣本，取樣量在1.5g~10g之間。 2. 患者提供的糞便樣本必須使用廣州市康立明生物科技有限責(zé)任公司生產(chǎn)的糞便采集裝置收集，3天內(nèi)寄送至檢測(cè)機(jī)構(gòu)。 3. 檢測(cè)機(jī)構(gòu)在收到樣本后建議立刻進(jìn)行DNA的提取及亞硫酸鹽的處理、熒光PCR的檢測(cè)，否則建議將含有樣本保存液的糞便樣本振蕩混勻，凍于-80℃±5℃冰箱，保存期不超過6個(gè)月。4. 本試劑盒提取和亞硫酸鹽處理的DNA不適于測(cè)定OD260來定量；不適于通過OD260/OD280來判定樣本質(zhì)量。 5. 提取和亞硫酸鹽處理完的DNA建議立即檢測(cè)，否則請(qǐng)于-20℃以下保存，保存時(shí)間不要超過1個(gè)月。
【檢驗(yàn)方法】
1. 核酸提取及轉(zhuǎn)化工作液的準(zhǔn)備
1.1 90人份工作液的準(zhǔn)備
1.1.1 洗液W2的準(zhǔn)備
* 將100 ml無水乙醇加入洗液W2中，蓋好蓋后上下顛倒6次混勻。在標(biāo)簽的側(cè)面“已加入無水乙醇”的方框“□”內(nèi)標(biāo)記“√”號(hào)。
1.1.2 溶液C的準(zhǔn)備
* 將17 ml無水乙醇加入溶液C中，蓋好蓋后上下顛倒6次混勻。在標(biāo)簽的側(cè)面“已加入無水乙醇”的方框“□”內(nèi)標(biāo)記“√”號(hào)。（注意：該試劑要現(xiàn)配現(xiàn)用，溶液C與無水乙醇的體積比例是1：4）
1.2 10人份工作液的準(zhǔn)備
1.2.1 洗液W2的準(zhǔn)備
* 將16 ml無水乙醇加入洗液W2中，蓋好蓋后上下顛倒6次混勻。在標(biāo)簽的側(cè)面“已加入無水乙醇”的方框“□”內(nèi)標(biāo)記“√”號(hào)。
1.1.2 溶液C的準(zhǔn)備
* 將2.8 ml無水乙醇加入溶液C中，蓋好蓋后上下顛倒6次混勻。在標(biāo)簽的側(cè)面“已加入無水乙醇”的方框“□”內(nèi)標(biāo)記“√”號(hào)。（注意：該試劑要現(xiàn)配現(xiàn)用，溶液C與無水乙醇的體積比例是1：4）
2. 糞便核酸提取及轉(zhuǎn)化
2.1 糞便樣本、陰性質(zhì)控品以及陽性質(zhì)控品的融化
* 分別將1份陰性質(zhì)控品、1份陽性質(zhì)控品和待檢測(cè)的糞便樣本置于2~8℃過夜解凍，取出樣本管，擦去管外壁水珠將糞便樣本混合均勻。（注意：樣品解凍后，應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作）
2.2 離心
* 將糞便樣本5000 rpm離心10分鐘。
* 取9ml上清轉(zhuǎn)移至新的10 ml離心管中，5000rpm離心10分鐘。
2.3 過柱
* 取3.2 ml離心后的懸浮液加入到SPE柱中，5000 rpm離心5分鐘。（剩余的上清可置于-80±5℃保存）
2.4 棄柱
* 棄SPE柱內(nèi)柱。
* 將解凍的陰性質(zhì)控品、陽性質(zhì)控品各3 ml分別加到新的10 ml離心管中。
2.5 裂解
* 在樣本、陰性質(zhì)控品、陽性質(zhì)控品中分別加入裂解液2 ml，同時(shí)加入磁珠M1 50 μl，蓋好蓋后振蕩混勻。（注意：磁珠M1加入前請(qǐng)振蕩混勻，觀察管底無明顯的沉淀物后再加入；磁珠M1與磁珠M2不能混用。）
2.6 孵育
* 將離心管放置在干浴器上，95℃孵育15分鐘后取出離心管快速搖勻，室溫（20℃~30℃）條件下靜置1小時(shí)。（注意：離心管靜置時(shí)應(yīng)自然降溫，避免快速降溫的因素。）
2.7 轉(zhuǎn)移
* 1500 rpm離心10sec后將離心管置于磁力架5分鐘，吸棄4.2 ml液體，將剩余液體以及磁珠轉(zhuǎn)移至新的2 ml離心管中。
* 將離心管渦旋振蕩至肉眼無可見的磁珠團(tuán)塊，簡短離心后將離心管置于磁力架1-3分鐘，吸棄液體。（注意：渦旋振蕩效果影響實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，應(yīng)使磁珠充分分散。）
2.8 第一次洗滌
* 加入800μl洗液W1，渦旋振蕩至肉眼無可見的磁珠團(tuán)塊后簡短離心，將離心管置于干浴器中室溫1300 rpm振蕩孵育1分鐘，簡短離心后將離心管置于磁力架1-3分鐘，吸棄液體。（注意：渦旋振蕩效果影響實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，應(yīng)使磁珠充分分散；洗液W1與洗液W2不能混用）
2.9 轉(zhuǎn)化
* 加入50μl溶液A渦旋振蕩將管壁磁珠洗下來，簡短離心室溫1300 rpm振蕩20分鐘，簡短離心；將離心管置于磁力架1-3分鐘，使用移液器轉(zhuǎn)移溶液至新的離心管。
* 加入100μl溶液B，混勻后簡短離心，干浴器65℃孵育70分鐘后簡短離心。
2.10 純化
* 加入450 μl結(jié)合液以及50 μl磁珠M2，室溫1300 rpm振蕩孵育15分鐘，簡短離心置于磁力架1分鐘，吸棄液體；再次簡短離心置于磁力架1分鐘，吸棄液體。 （注意：磁珠M2加入前請(qǐng)振蕩混勻，觀察管底無明顯的沉淀物后再加入；磁珠M2與磁珠M1不能混用。）
2.11 第二次洗滌
*加入800 μl洗液W2，使用移液器輕輕吹散磁珠，將磁珠轉(zhuǎn)移至一個(gè)新的2ml離心管中。室溫干浴器1300 rpm振蕩混勻1分鐘后簡短離心，置于磁力架1分鐘，吸棄液體。
2.12 脫磺酸基團(tuán)
* 加入200μl已經(jīng)加入無水乙醇的溶液C室溫1300rpm振蕩孵育15分鐘，簡短離心置于磁力架1分鐘，吸棄液體。
2.13 第三次洗滌
* 加入200 μl洗液W2，室溫干浴器1300rpm振蕩混勻1分鐘后置于磁力架1分鐘，簡短離心，吸棄液體。
2.14第四次洗滌
* 加入200 μl洗液W2，室溫干浴器1300rpm振蕩混勻1分鐘后簡短離心，置于磁力架1分鐘，吸棄液體。
2.15 干燥
* 打開離心管室溫干燥10分鐘。（注意：不要增加干燥溫度和干燥時(shí)間，不需要振蕩） 2.16 洗脫
* 將洗脫液放置在冰盒上自然融化，加入60 μl洗脫液，干浴器65℃，1300rpm孵育10分鐘，簡短離心置于磁力架上1分鐘，將洗脫下來的溶液轉(zhuǎn)移至新的離心管中，蓋好管蓋并且標(biāo)記。
3. 擴(kuò)增試劑準(zhǔn)備（PCR反應(yīng)液配置區(qū)）
3.1 將PCR反應(yīng)液1以及PCR反應(yīng)液2插入冰盒中，自然融化。
3.2 按照以下反應(yīng)體系加入各種成分。
表2：PCR反應(yīng)加樣方式
3.3 加樣完成后，充分混勻后離心，將PCR管放入PCR儀中。
3.4 按照下面步驟設(shè)置PCR的反應(yīng)條件（下表）：
表3：PCR反應(yīng)程序
3.5分析條件設(shè)置：Roche LightCycler 480 II儀器結(jié)果分析時(shí)使用AbsQuant/2nd Derivative Max分析方法分析擴(kuò)增的循環(huán)數(shù)；ABI 7500儀器結(jié)果分析時(shí)使用儀器默認(rèn)基線，SDS V2.3.1軟件分析時(shí)，F(xiàn)AM通道（檢測(cè)SDC2基因）值設(shè)置為65000，TexasRed通道（檢測(cè)ACTB基因）閾值設(shè)置為95000。FAM通道和Texas Red通道擴(kuò)增曲線呈現(xiàn)“S”型擴(kuò)增才可計(jì)算Ct值。
【陽性判斷值】 本試劑盒檢測(cè)臨床樣本，得到465例有效數(shù)據(jù)中結(jié)直腸癌患者120例、腺瘤（≥10mm）76例、腸息肉樣本（＜10mm）31例、腸炎樣本24例、胃炎樣本6例、胃癌樣本18例、胃息肉樣本1例，神經(jīng)內(nèi)分泌瘤樣本3例、肝癌和腸道脂肪瘤樣本各1例、正常人184例。樣本的ACTB基因的Ct值在22至40之間，取95%分位值，Ct值≤36時(shí)判定為樣本質(zhì)量合格。在陽性判斷值的選擇時(shí)根據(jù)到臨床的需要，在樣本質(zhì)量合格的條件下選擇SDC2基因Ct值≤38為陽性結(jié)果；SDC2基因Ct值＞38時(shí)為陰性結(jié)果。檢測(cè)結(jié)果顯示在檢測(cè)特異性為92.2%時(shí)（248/269）結(jié)直腸癌患者的檢測(cè)靈敏度為82.25%（99/120），腺瘤患者的檢測(cè)靈敏度為47.4%（36/76）。31例息肉樣本檢測(cè)結(jié)果為4例陽性27例陰性。腸炎患者樣本24例檢測(cè)結(jié)果為1例陽性23例陰性；胃炎疾病患者樣本6例檢測(cè)結(jié)果為陰性；胃癌患者樣本18例檢測(cè)結(jié)果為1例陽性17例陰性；胃息肉1例檢測(cè)結(jié)果為陰性；肝癌患者樣本1例檢測(cè)結(jié)果為陰性；腸道脂肪瘤患者樣本1例檢測(cè)結(jié)果為陰性。神經(jīng)內(nèi)分泌瘤樣本3例檢測(cè)結(jié)果為陰性。 因此，本試劑盒的陽性判斷值為：ACTB基因的Ct值≤36，甲基化SDC2基因Ct值≤38時(shí)判斷樣本為陽性；ACTB基因的Ct值≤36，甲基化SDC2基因Ct值＞38時(shí)判定為陰性樣本；ACTB基因Ct值＞36或者無Ct值時(shí)，判定為樣本不合格。
【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】
1. 試驗(yàn)結(jié)束以后運(yùn)行Ct值的計(jì)算，運(yùn)行無模板對(duì)照（NTC）的Ct值≥40或者沒有出現(xiàn)擴(kuò)增曲線時(shí)，說明試驗(yàn)無污染存在，可以繼續(xù)分析試驗(yàn)情況。
2. 運(yùn)行陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品FAM通道，陽性質(zhì)控Ct值≤35時(shí)，陰性質(zhì)控Ct值≥40或者無Ct值；Texas Red通道陰性質(zhì)控品、陽性質(zhì)控品Ct值均≤35時(shí)，說明實(shí)驗(yàn)體系正常，可以繼續(xù)分析實(shí)驗(yàn)。
3. 在檢測(cè)樣本反應(yīng)孔中Texas Red通道，一般Ct值≤36，可以繼續(xù)分析，如果Ct值>36則說明樣本DNA量不足或者降解嚴(yán)重，不適合實(shí)驗(yàn)分析。
4. 在檢測(cè)樣本反應(yīng)孔FAM通道中，在沒有出現(xiàn)擴(kuò)增曲線或者Ct值＞38的樣本為陰性。出現(xiàn)S型擴(kuò)增曲線且Ct值≤38的樣本為陽性。
5. 判定為陽性的樣本的患者，建議進(jìn)行腸鏡檢查以確診；判定為陰性的患者不排除患病的可能；判定為樣本不合格的，建議患者重新取樣檢測(cè)。
6. 干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：糞便樣品中分別含有以下物質(zhì)：動(dòng)物DNA（500ng/ml）、植物組織（500ng/ml）、植物油（10μl/ml）、通便類藥物甘露醇（75mg/ml）、通便靈膠囊（7.25mg/ml）、痔瘡膏（24.75mg/ml）、嗎丁啉（0.14mg/ml）、四環(huán)素（10.65mg/ml）、青霉素（2.56mg/ml）、布洛芬膠囊75μg/ml、胃藥斯達(dá)舒（6.84mg/ml）、噢美拉唑（2.82mg/ml）、頭孢克肟（20.5mg/ml）、鹽酸左氧氟沙星（0.15mg/ml）、西咪替?。?mg/ml）、感冒靈膠囊（0.27mg/ml）對(duì)檢測(cè)結(jié)果無影響。
【檢測(cè)方法的局限性】
1. 本檢測(cè)試劑盒僅能檢測(cè)使用本公司生產(chǎn)的糞便樣本收集裝置收集的糞便樣本。其他途徑收集的糞便樣本不適用于本試劑盒的檢測(cè)。
2. 樣本的收集、存儲(chǔ)以及DNA的提取和亞硫酸鹽的處理需要按照要求進(jìn)行，否則可能影響檢測(cè)結(jié)果導(dǎo)致假陰性和假陽性的發(fā)生。
3. 本檢測(cè)試劑盒檢測(cè)結(jié)果僅供臨床參考不得作為臨床確診的依據(jù)，應(yīng)結(jié)合其他臨床診斷結(jié)果進(jìn)行判定。判定為陽性的患者，建議接受結(jié)腸鏡檢查以便確診；判定為陰性的患者不排除患病的可能；判定為無效結(jié)果的樣本，建議患者重新取樣檢測(cè)。
【產(chǎn)品的性能指標(biāo)】
1. 外觀： 試劑盒組份齊全；包裝外觀清潔、無泄露、無破損；標(biāo)志、標(biāo)簽字跡清楚。
2. 陰/陽性符合率
2.1 陰性符合率：檢測(cè)8份SDC2陰性參考品(N1~N8)，甲基化SDC2基因擴(kuò)增結(jié)果應(yīng)均為陰性。
2.2 陽性符合率：檢測(cè)7份SDC2陽性參考品(P1~P7），甲基化SDC2基因擴(kuò)增結(jié)果應(yīng)均為陽性。
3. 特異性：檢測(cè)1份SDC2特異性參考品T，甲基化SDC2基因擴(kuò)增結(jié)果呈陰性。
4. 靈敏度：檢測(cè)SDC2靈敏度參考品L 20次，至少17次甲基化SDC2基因擴(kuò)增呈陽性。
5. 精密度：分別檢測(cè)SDC2精密度參考品J1、SDC2精密度參考品J2各10次，結(jié)果滿足甲基化SDC2基因擴(kuò)增呈陽性，同時(shí)內(nèi)參基因ACTB擴(kuò)增曲線正常。計(jì)算甲基化SDC2基因以及內(nèi)參基因ACTB的Ct值的變異系數(shù)（CV）均不高于5%。
6. 在多中心臨床試驗(yàn)中，對(duì)1213例有效病例進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果表明本試劑盒對(duì)結(jié)直腸癌樣本的檢測(cè)敏感性為84.22%（315/374），特異性為97.85%（821/839），總符合率為93.65%（1136/1213），Kappa值為0.85。其中有10例腸癌樣本其SDC2基因38＜Ct值≤39，也應(yīng)引起臨床的重視。
【注意事項(xiàng)】
1. 本試劑盒僅用于體外診斷，使用前請(qǐng)?jiān)敿?xì)閱讀說明書并必須嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行操作。 2. 應(yīng)由具備專業(yè)經(jīng)驗(yàn)或經(jīng)培訓(xùn)合格的人員進(jìn)行操作。
3. 有關(guān)實(shí)驗(yàn)室管理規(guī)范請(qǐng)嚴(yán)格按照行業(yè)行政主管部門頒布的有關(guān)基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的管理規(guī)范執(zhí)行。
4. 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)按試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)、反應(yīng)液配置區(qū)、擴(kuò)增檢測(cè)分析區(qū)分隔使用。工作流程：操作過程應(yīng)工作服、帽、鞋、手套等穿戴齊全，各區(qū)物品均為專用，不得交叉使用，避免污染。
5. 反應(yīng)液分裝時(shí)應(yīng)盡量避免產(chǎn)生氣泡，并注意防止泄漏，以免熒光物質(zhì)污染儀器。
6. 實(shí)驗(yàn)過程中若出現(xiàn)標(biāo)本及試劑污染工作臺(tái)及移液器，應(yīng)及時(shí)用10％次氯酸鈉或75％酒精處理。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后應(yīng)立即清潔工作臺(tái)，并定期對(duì)工作臺(tái)及各種實(shí)驗(yàn)用品進(jìn)行消毒。
7. 不要使用超過有效期的試劑，不同批次的產(chǎn)品不能混用。
8. 加樣所用的加樣器需要定期檢測(cè)，保證加樣的準(zhǔn)確性
9. 溶液B為亞硫酸鹽溶液，操作時(shí)勿接觸皮膚和眼睛；如果接觸到應(yīng)迅速擦干凈用大量的水沖洗。
10. 黃連素（9.23mg/ml）對(duì)檢測(cè)結(jié)果有影響，因此患者取樣前1天應(yīng)注意勿服用藥物黃連素。
11. 為了避免樣本中任何潛在的生物危險(xiǎn)，檢測(cè)樣本應(yīng)視為具有傳染性物質(zhì)，避免接觸到皮膚和粘膜；樣本的處理建議在可防止氣霧外流的生物安全柜中操作，樣本制備區(qū)所用過的試管、吸頭需打入盛有消毒劑的容器，并與廢棄物一起滅菌后方可丟棄；樣本操作和處理均需符合相關(guān)法規(guī)要求：衛(wèi)生部《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通用準(zhǔn)則》和《醫(yī)療廢物管理?xiàng)l例》。
【標(biāo)識(shí)的解釋】
【參考文獻(xiàn)】
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【基本信息】
注冊(cè)人/生產(chǎn)企業(yè)名稱：廣州市康立明生物科技有限責(zé)任公司 注
冊(cè)人/生產(chǎn)企業(yè)住所：廣州高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)開發(fā)區(qū)科學(xué)城開源大道11號(hào)A2棟第六層
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生產(chǎn)許可證編號(hào)：
【醫(yī)療器械注冊(cè)證編號(hào)/產(chǎn)品技術(shù)要求編號(hào)】
【說明書核準(zhǔn)及修改日期】
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