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【分享】PCR的原理、分類、品牌市場分析

2017-11-09 1376

  PCR概念


聚合酶鏈反應(基因擴增):基本原理 類似于DNA的天然復制過程,其特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。PCR是模擬體內DNA復制過程,在體外特異性擴增DNA片段的一種技術。


  PCR的應用領域


1、遺傳病和某些疑難病的診斷


2、病原體的檢測。某些惡性疾病一般用微生物學、生化和免疫 學技術無法查出病原體時,可用PCR來檢查。


3、法醫(yī)和刑偵鑒定。


4、癌基因的檢查。


5、基因探針的制備。


6、基因組測序、染色體巡視。


7、cDNA庫的構建。


8、基因突變的分析和定位誘變。


9、DNA重組。


10、基因的分享和克隆。


  標準的PCR過程分為三步


DNA變性


(90℃-96℃):雙鏈DNA模板在熱作用下,氫鍵斷裂,形成單鏈DNA


退火


(60℃-65℃):系統(tǒng)溫度降低,引物與DNA模板結合,形成局部雙鏈。


延伸


(70℃-75℃):在Taq酶(在72℃左右,活性最佳)的作用下,以dNTP為原料,從引物的3′端開始以從5′→3′端的方向延伸,合成與模板互補的DNA鏈。




  PCR儀的分類


根據(jù)DNA擴增的目的和檢測的標準可以將PCR儀分為普通PCR儀,梯度PCR儀,原位PCR,實時熒光定量PCR儀等幾類。


普通PCR儀


一般把一次PCR擴增只能運行一個特定退火溫度的PCR儀,稱之為普通PCR儀。如果要用它做不同的退火溫度則需要多次運行。主要是用作簡單的,對目的基因退火溫度的擴增。


梯度PCR儀


一次性PCR擴增可以設置一系列不同的退火溫度條件(通常12種溫度梯度)的稱之為梯度PCR儀。因為被擴增的不同的DNA片段其最適合的退火溫度不同,通過設置一系列的梯度退火溫度進行擴增,從而一次性PCR擴增就可以篩選出表達量高的最適合退火溫度進行有效的擴增。主要用于研究未知DNA退火溫度的擴增,這樣既節(jié)約時間,也節(jié)約經(jīng)費。在不設置梯度的情況下亦可當做普通的PCR用。


原位PCR儀


是用于從細胞內靶DNA的定位分析的細胞內基因擴增儀。如病原基因在細胞的位置或目的基因在細胞內的作用位置等。可保持細胞或組織的完整性,使PCR反應體系滲透到組織和細胞中,在細胞的靶DNA所在的位置進行基因擴增。不但可以檢測到靶DNA,還能標出靶序列在細胞內的位置。于分子和細胞水平上研究疾病的發(fā)病機理和臨床過程及病理的轉變有著重大的實用價值。


實時熒光定量PCR儀


在普通PCR儀基礎上增加一個熒光信號采集系統(tǒng)和計算機分析處理系統(tǒng),就成了熒光定量PCR。其PCR擴增原理和普通PCR擴增原理相同,只是在PCR擴增時加入的引物是利用同位素、熒光素等進行標記,使用引物和熒光探針同時與模板特異性結合擴增。擴增的結果通過熒光信號采集系統(tǒng)實時采集信號連接輸送到計算機分析處理系統(tǒng),得出量化的實時結果輸出。


熒光定量PCR儀有單通道,雙通道和多通道之分。當只用一種熒光探針標記的時候,選用單通道;有多種熒光標記的時候使用多通道。單通道也可以檢測多熒光的標記和目的基因表達產(chǎn)物,因為一次只能檢測一種目的基因的擴增量,需多次擴增才能檢測完不同的目的基因片段的量。


  PCR的各個品牌


國產(chǎn)品牌


上海領成、西安天隆、杭州郎基、珠海黑馬、杭州博日、上海宏石、廈門安普利、杭州晶格、北京亞力恩、北京東勝、上海楓嶺。


目前國內市場主要被:上海領成,西安天隆,杭州郞基,珠海黑馬,杭州博日五大品牌所占有。


普通PCR儀價格在18000-20000元左右,梯度PCR儀價格在26000-28000元左右,實時熒光定量PCR儀價格在130000-150000元左右。


進口品牌


美國ABI、美國Labnet萊伯特、美國Bio-rad伯樂、英國Genetech、英國Techne、德國Eppendorf艾本德、新加坡Esco藝思高、日本TaKaRa、日本ASTEC、澳大利亞Corbett柯柏特、德國Jena耶拿、德國biometra、德國BOECO、英國CLEAVER科麗沃、瑞士ROCHE羅氏、英國Quanta、德國PEQLAB、荷蘭Creacon、美國Cepheid、美國Thermo熱電。


目前進口品牌中美國ABI,美國labnet,美國Bio-rad,日本TaKaRa,英國Techne,德國Eppendorf六大品牌占有率比較高。


根據(jù)近年來銷量分析,其中美國ABI除了9700型普通PCR基因擴增儀和2720型基因擴增儀外,新推出的高精確性的Veriti梯度PCR儀,也是所有進口品牌梯度PCR儀中最受客戶認可的一款,是近兩年來銷量較高一款PCR儀;


其次是美國Bio-rad;


日本TaKaRa和美國Labnet梯度PCR儀,價格相對進口品牌中比較便宜,質量和性能也比較穩(wěn)定,從而深廣大客戶的認可,他們的銷售成交價在45000-50000左右,而其它同性能價格的儀器價格在,60000-80000元,所以近年來市場的占有率呈上升的趨勢;


德國Eppendorf和美國Bio-rad是以直銷的模式銷售,因其壟斷直銷方式,外面的經(jīng)銷商或者當?shù)氐慕?jīng)銷商無法進去競爭,所以相同性能的產(chǎn)品價格相對其他品牌要高很多,成交價格一般在7-9萬元左右,市場占有率相對有所下降;


英國Techne在國內生產(chǎn),價格相對進口品牌中要低很多,銷量有所上升,市場占有率也上升,價格在35000-40000元左右。