附件9
堿性磷酸酶檢測試劑盒產(chǎn)品注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則
本指導(dǎo)原則的主要目的是規(guī)范堿性磷酸酶檢測試劑（盒）的技術(shù)審評工作，幫助審評人員理解和掌握該類產(chǎn)品的原理、組成、性能、預(yù)期用途等內(nèi)容，明確技術(shù)審評過程中應(yīng)該關(guān)注和重點把握的內(nèi)容，對產(chǎn)品安全性、有效性作出系統(tǒng)評價。
本指導(dǎo)原則是對堿性磷酸酶檢測試劑（盒）的一般要求，審評人員應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中的具體內(nèi)容是否適用并對注冊申報資料的內(nèi)容進行補充要求。
本指導(dǎo)原則是對技術(shù)審查人員的指導(dǎo)性文件，但不包括注冊審批所涉及的行政事項，亦不作為法規(guī)強制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但是需要提供詳細(xì)的研究資料和驗證資料。應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)、國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的前提下使用本指導(dǎo)原則。
本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善，以及科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將進行適時的調(diào)整。
一、適用范圍
堿性磷酸酶檢測試劑（盒）是指基于分光光度法原理對人血清、血漿或其他體液中的堿性磷酸酶活性進行體外定量分析的試劑。本指導(dǎo)原則適用于進行首次注冊申報和相關(guān)許可事項變更的產(chǎn)品。
堿性磷酸酶活性的測定方法目前主要有連續(xù)監(jiān)測法和比色法兩類：
1. 連續(xù)監(jiān)測法（磷酸對硝基苯酚底物法）
堿性磷酸酶催化水解磷酸對硝基苯酚（4-NPP），生成對硝基苯酚（4-NP），在特定波長處監(jiān)測吸光度變化速率，可計算堿性磷酸酶活性。
2. 比色法（磷酸苯二鈉底物法）
堿性磷酸酶催化水解磷酸苯二鈉，生成游離酚，酚與4-氨基安替比林結(jié)合，經(jīng)鐵氰化鉀氧化生成紅色的醌衍生物，在特定波長處監(jiān)測吸光度值，可計算堿性磷酸酶活性。
從方法學(xué)考慮，本文主要指以堿性磷酸酶水解底物引起特定產(chǎn)物的吸光度的改變對堿性磷酸酶活性進行定量檢測的體外診斷試劑，不包括干化學(xué)、酶聯(lián)免疫及金標(biāo)類檢測試劑。前列腺堿性磷酸酶試劑不屬于本指導(dǎo)原則涵蓋的范疇。
依據(jù)《體外診斷試劑注冊管理辦法》（試行）、《食品藥品監(jiān)管總局關(guān)于印發(fā)體外診斷試劑分類子目錄的通知》（食藥監(jiān)械管〔2013〕242號），肌酸激酶檢測試劑屬于酶類檢測試劑，管理類別為Ⅱ類，分類代號為6840。
二、基本要求
（一）綜述資料
綜述資料主要包括產(chǎn)品預(yù)期用途、產(chǎn)品描述、方法學(xué)特征、生物安全性評價、研究結(jié)果總結(jié)以及同類產(chǎn)品上市情況介紹等內(nèi)容，應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊管理辦法（試行）》（以下簡稱《辦法》）和《體外診斷試劑注冊申報資料形式與基本要求》的相關(guān)要求。相關(guān)描述應(yīng)至少包含如下內(nèi)容：
1.產(chǎn)品預(yù)期用途及輔助診斷的臨床適應(yīng)癥背景情況：
（1）堿性磷酸酶的生物學(xué)特征、結(jié)構(gòu)與功能，在體內(nèi)正常和病理狀態(tài)下的代謝途徑和存在形式。
（2）與預(yù)期用途相關(guān)的臨床適應(yīng)癥背景情況，如臨床適應(yīng)癥的發(fā)生率、易感人群等，相關(guān)的臨床或?qū)嶒炇以\斷方法等。
2.產(chǎn)品描述：包括產(chǎn)品所采用的技術(shù)原理，主要原材料的來源及制備方法，主要生產(chǎn)工藝過程及關(guān)鍵控制點，質(zhì)控品、校準(zhǔn)品的制備方法及溯源情況。
3.有關(guān)生物安全性方面的說明：由于體外診斷試劑中的主要原材料可能是由各種動物、病原體、人源的組織和體液等生物材料經(jīng)處理或添加某些物質(zhì)制備而成，為保證產(chǎn)品在運輸、使用過程中對使用者和環(huán)境的安全，研究者應(yīng)提供對上述原材料所采用的滅活等試驗方法的說明。
4.有關(guān)產(chǎn)品主要研究結(jié)果的總結(jié)和評價。
5.其他：包括同類產(chǎn)品在國內(nèi)外批準(zhǔn)上市的情況。相關(guān)產(chǎn)品所采用的技術(shù)方法及臨床應(yīng)用情況，申請注冊產(chǎn)品與國內(nèi)外同類產(chǎn)品的異同等。對于新診斷試劑產(chǎn)品，需提供被測物與預(yù)期適用的臨床適應(yīng)癥之間關(guān)系的文獻資料。
（二）產(chǎn)品說明書
說明書承載了產(chǎn)品預(yù)期用途、試驗方法、檢測結(jié)果解釋以及注意事項等重要信息，是指導(dǎo)實驗室工作人員正確操作、臨床醫(yī)生針對檢驗結(jié)果給出合理醫(yī)學(xué)解釋的重要依據(jù)，因此，產(chǎn)品說明書是體外診斷試劑注冊申報最重要的文件之一。
結(jié)合《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》的要求，下面對堿性磷酸酶檢測試劑說明書的重點內(nèi)容進行詳細(xì)說明。
1.【產(chǎn)品名稱】
（1）試劑（盒）名稱由三部分組成：被測物名稱、用途、方法或原理。例如：堿性磷酸酶檢測試劑盒（磷酸對硝基苯酚底物法）。
（2）英文名稱應(yīng)當(dāng)正確、完整、直譯，不宜只寫縮寫。
2.【包裝規(guī)格】
包裝規(guī)格應(yīng)明確單、雙或其他多試劑類型；如不同包裝規(guī)格有與之特定對應(yīng)的機型，則應(yīng)同時明確適用機型。
如: R1:1×60ml,R2: 1×15ml 日立7170生化分析儀
3.【預(yù)期用途】應(yīng)至少包括以下幾部分內(nèi)容：
3.1說明試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿和/或其他體液中堿性磷酸酶的活性；同時應(yīng)明確與目的檢測物相關(guān)的臨床適應(yīng)癥背景情況。
3.2堿性磷酸酶異常情況常見于哪些疾病，其升高或降低可能有哪些醫(yī)學(xué)解釋。
如：堿性磷酸酶主要用于阻塞性黃疸、肝膽疾病、骨組織疾病等的檢查。生理性增高：兒童在生理性的骨骼發(fā)育期，堿性磷酸酶活力可比正常人高1～2倍；病理性升高：(1)骨骼疾病如佝僂病、軟骨病等；(2)肝膽疾病如肝外膽道阻塞、肝硬化、毛細(xì)膽管性肝炎等；(3)其他疾病如甲狀旁腺機能亢進。病理性降低：見于重癥慢性腎炎、兒童甲狀腺機能不全、貧血等。
作為支持性資料，申請人應(yīng)提供由教科書、臨床專著、核心期刊文獻或英文SCI文獻等有關(guān)臨床適應(yīng)癥背景的資料。
4.【檢驗原理】應(yīng)結(jié)合產(chǎn)品主要成分簡要說明檢驗的原理、方法，必要時可采取圖示方法表示，檢測原理的描述應(yīng)結(jié)合產(chǎn)品主要組成成分、被測物和產(chǎn)物的關(guān)系進行描述：
如：本產(chǎn)品以磷酸對硝基苯酚（4-NPP）為底物，2-氨基-2-甲基-1-丙醇（AMP）為磷酸?；荏w物質(zhì)，增進酶反應(yīng)速率，在堿性磷酸酶（ALP）催化下，4-NPP分裂出磷酸基團，生成游離的對硝基苯酚（4-NP），后者在堿性溶液中轉(zhuǎn)變成醌式結(jié)構(gòu)，呈現(xiàn)較深的黃色。反應(yīng)式如下：
磷酸對硝基苯酚+H2O
4-對硝基苯酚+磷酸鹽
磷酸對硝基苯酚+AMP4-對硝基苯酚+AMP-磷酸鹽
由于反應(yīng)中4-NP的生成速率與ALP活性呈正比，因此在
5.【主要組成成份】應(yīng)明確以下內(nèi)容：
試劑盒提供的試劑組分的名稱、比例或濃度，各組分是否可以互換；如含有校準(zhǔn)品或質(zhì)控品，除明確組成成份及生物學(xué)來源外，還應(yīng)明確其定值及溯源性，溯源性應(yīng)寫明溯源的最高級別，包括標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)或參考物的發(fā)布單位及編號，質(zhì)控品應(yīng)明確靶值范圍。
例如：
本試劑盒由R1、R2和校準(zhǔn)品（選購）組成：
R1： AMP 1.0 mmol/L，硫酸鋅 1.5 mmol/L，醋酸鎂 2.5 mmol/L， N-羥乙基乙二胺三乙酸（HEDTA） 2.5mmol/L。
R2：磷酸-4-硝基苯酚 100 mmol/L，氯化鎂10.5 mmol/L
校準(zhǔn)品：含有堿性磷酸酶的人源血清基質(zhì)，校準(zhǔn)品具有批特異性，每批定值，定值見瓶簽標(biāo)示，量值可溯源至國際參考物質(zhì)JCCLS CRM001b。
6.【儲存條件及有效期】應(yīng)明確未開封的試劑實際儲存條件及有效期，開封后的待機穩(wěn)定期或開瓶穩(wěn)定期。干粉試劑應(yīng)明確復(fù)溶穩(wěn)定期。
注：保存條件不應(yīng)有模糊表述，如“常溫”、“室溫”。
7.【適用儀器】應(yīng)明確可適用的具體品牌、型號的生化分析儀器。
8.【樣本要求】重點明確以下內(nèi)容：樣本類型、處理、保存期限及保存條件（短期、長期），運輸條件等。如有血漿樣本，應(yīng)注明對抗凝劑的要求（如草酸鹽、檸檬酸鹽、EDTA鈉鹽對堿性磷酸酶活性造成干擾，應(yīng)明確避免使用的提示）。冷藏/冷凍樣本檢測前是否須恢復(fù)室溫，可凍融次數(shù)。特殊體液標(biāo)本還應(yīng)詳細(xì)描述對采集條件、保存液、容器要求等可能影響檢測結(jié)果的要求。
9.【檢驗方法】詳細(xì)說明試驗操作的各個步驟，包括：
9.1試劑配制方法、注意事項；
9.2試驗條件：溫度、時間、測定主/副波長、試劑用量、樣本用量、測定方法、反應(yīng)類型、反應(yīng)方向、反應(yīng)時間等以及試驗過程中的注意事項；
9.3校準(zhǔn)：校準(zhǔn)品的使用方法、注意事項、校準(zhǔn)曲線的繪制。
9.4質(zhì)量控制：質(zhì)控品的使用方法、對質(zhì)控結(jié)果的必要解釋以及推薦的質(zhì)控周期等；建議在本部分注明以下字樣：如果質(zhì)控結(jié)果與預(yù)期不符，提示檢測結(jié)果不可靠，不應(yīng)出具檢測報告。
9.5檢驗結(jié)果的計算：應(yīng)明確檢驗結(jié)果的計算方法。超出線性范圍的樣本如進行稀釋，應(yīng)結(jié)合可報告范圍研究結(jié)果明確稀釋液類型和最大可稀釋比例。
10.【參考值（范圍）】應(yīng)注明常用樣本類型的正常參考值（范圍），成人、兒童應(yīng)按性別和年齡段，分別明確參考范圍，并說明參考值確定方法。建議注明“由于地理、人種、性別和年齡等差異，建議各實驗室建立自己的參考范圍”。
11.【檢驗結(jié)果的解釋】說明可能對檢驗結(jié)果產(chǎn)生影響的因素，在何種情況下需要進行確認(rèn)試驗。
12.【檢驗方法的局限性】說明該檢驗方法的局限性，如：存在的干擾因素，明確黃疸、溶血、脂濁及藥物等內(nèi)、外源性干擾物對測定的影響，同時列出干擾物的具體濃度。
13.【產(chǎn)品性能指標(biāo)】至少應(yīng)詳述以下性能指標(biāo)，性能指標(biāo)應(yīng)不低于標(biāo)準(zhǔn)有關(guān)技術(shù)指標(biāo)的要求。
13.1空白吸光度及空白吸光度變化率；
13.2分析靈敏度；
13.3準(zhǔn)確度；
13.4精密度（重復(fù)性和批間差）；
13.5線性范圍（線性相關(guān)系數(shù)和線性偏差）。
14.【注意事項】應(yīng)至少包括以下內(nèi)容：
14.1本試劑盒的檢測結(jié)果僅供臨床參考，對患者的臨床管理應(yīng)結(jié)合其癥狀/體征、病史、其他實驗室檢查及治療反應(yīng)等情況綜合考慮。
14.2本試劑盒僅供體外診斷用，試劑中含有的化學(xué)成分接觸人體后是否會產(chǎn)生不良的影響后果。
14.3采用不同方法學(xué)的試劑檢測所得結(jié)果不應(yīng)直接相互比較，以免造成錯誤的醫(yī)學(xué)解釋；建議實驗室在發(fā)給臨床醫(yī)生的檢測報告注明所用試劑特征。
14.3 有關(guān)人源組分的警告，如：試劑盒內(nèi)的質(zhì)控品、校準(zhǔn)品或其他人源組分，雖已經(jīng)通過了HBs-Ag、HIV1/2-Ab、HCV-Ab等項目的檢測，但截至目前，沒有任何一項檢測可以確保絕對安全，故仍應(yīng)將這些組分作為潛在傳染源對待。
14.4樣本：（1）采集時間要求、與用藥的先后順序或用藥后時間間隔等；（2）對所有樣本和反應(yīng)廢棄物都應(yīng)視為傳染源對待。
14.5其他有關(guān)堿性磷酸酶測定的注意事項。
15.【參考文獻】應(yīng)當(dāng)注明在編制說明書時所引用的參考文獻。
16.【生產(chǎn)企業(yè)】應(yīng)當(dāng)注明企業(yè)名稱、地址（如注冊地址與生產(chǎn)地址不一致，應(yīng)當(dāng)分別列出）、郵政編碼、電話和傳真號碼、網(wǎng)址（如有）。
17.【醫(yī)療器械生產(chǎn)企業(yè)許可證編號】、【醫(yī)療器械注冊證書編號】、【產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)編號】、【說明書批準(zhǔn)及修改時間】，未核準(zhǔn)的內(nèi)容可空缺。
（三）擬定產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)及編制說明
擬定產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊管理辦法》和《體外診斷試劑注冊申報資料基本要求》的相關(guān)規(guī)定。如已有相應(yīng)的國家/行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)發(fā)布，則企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的要求不得低于其相關(guān)要求。
下面就標(biāo)準(zhǔn)中涉及的產(chǎn)品適用的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)和主要性能指標(biāo)等相關(guān)內(nèi)容作簡要敘述。
（1）GB/T2829-2002周期檢驗計數(shù)抽樣程序及表（適用于對過程穩(wěn)定性的檢驗）
（2）GB/T 21415—2008體外診斷醫(yī)療器械 生物樣品中量的測量 校準(zhǔn)品和控制物質(zhì)賦值的計量學(xué)溯源性
（3）GB/T 191-2008 包裝儲運圖示標(biāo)志
（4）YY/T 0316-2008 醫(yī)療器械 風(fēng)險管理對醫(yī)療器械的應(yīng)用
（5）YY/T 0638—2008體外診斷醫(yī)療器械 生物樣品中量的測量 校準(zhǔn)品和控制物質(zhì)物中酶催化濃度賦值的計量學(xué)溯源性
（6）YY/T0466.1-2009醫(yī)療器械 用于醫(yī)療器械標(biāo)簽、標(biāo)記和提供信息的符號 第1部分：通用要求
（7）GB/T 26124-2011 臨床化學(xué)體外診斷試劑（盒）
（8）WS/T351— 2011 堿性磷酸酶(ALP)催化活性濃度測定參考方法
（9）GB/T 2828.1-2012 技術(shù)抽樣檢程序 第1部分：按接收質(zhì)量限（ALQ）檢索的逐批檢驗抽樣計劃
（10）WS/T404.1-2012臨床常用生化檢驗項目參考區(qū)間血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、堿性磷酸酶和γ-谷氨?；D(zhuǎn)移酶
2.主要性能指標(biāo)：
（1）外觀：
應(yīng)與申請人聲稱試劑外觀一致。這里可以包括試劑盒包裝外觀、試劑內(nèi)包裝外觀、試劑的外觀。
（2）裝量（凍干品不適用）：
試劑裝量應(yīng)不少于標(biāo)示裝量。
（3）空白吸光度：
用蒸餾水、去離子水或其他指定溶液作為空白加入工作試劑作為樣品測試時，試劑空白吸光度應(yīng)不大于企業(yè)規(guī)定的要求。
（4）空白吸光度變化率：
用蒸餾水、去離子水或其他指定溶液作為空白加入工作試劑作為樣品測試時，試劑空白吸光度變化率△A/min(
（5）分析靈敏度
用已知濃度或活性的樣品進行測試，記錄在試劑（盒）規(guī)定參數(shù)下產(chǎn)生的吸光度改變。換算為n單位吸光度差值（ΔA）或吸光度變化（ΔA/min）。應(yīng)符合生產(chǎn)企業(yè)給定范圍。
（6）線性范圍
用達到線性范圍上限活性的樣品和達到線性范圍下限活性的樣品，混合成至少5個稀釋濃度（xi）。分別測試試劑盒，每個稀釋濃度測試3次，分別求出測定結(jié)果的均值（yi）。以稀釋濃度（xi）為自變量，以測定結(jié)果均值（yi）為因變量求出線性回歸方程。按公式（1）計算線性回歸的相關(guān)系數(shù)（r）。
…………………………………（1）
稀釋濃度（xi）代入求出線性回歸方程，計算yi的估計值及yi與估計值的相對偏差或絕對偏差。
線性范圍應(yīng)至少達到但不限于25～750U/L（下限不得高于25U/L，上限不得低于750U/L）。
①相關(guān)系數(shù)（r）
線性相關(guān)系數(shù)r應(yīng)不小于0.990。
（線性范圍下限應(yīng)不低于產(chǎn)品的最低檢測限，不高于參考范圍下限）
②25-100U/L范圍內(nèi)，線性絕對偏差應(yīng)不超過±10U/L；101-750范圍內(nèi)，線性相對偏差應(yīng)不超過±10%。
（7）測量精密度
①批內(nèi)重復(fù)性
在重復(fù)性條件下，分別用試劑（盒）測試（50±10）U/L和(500±50)U/L的樣本或質(zhì)控樣品，重復(fù)測試至少10次（n≥10），分別計算測量值的平均值（
）和標(biāo)準(zhǔn)差（s）。計算變異系數(shù)（CV）,應(yīng)不大于5%。
②批內(nèi)瓶間差（干粉或凍干試劑）
用(120±12) U/L的樣本或質(zhì)控樣品測試同一批號的10個待檢試劑（盒），并計算10個測量值的平均值（
1）和標(biāo)準(zhǔn)差（s1）。
用(120±12) U/L的樣本或質(zhì)控樣品對該批號的1個待檢試劑（盒）重復(fù)測試10次，計算結(jié)果的均值（
2）和標(biāo)準(zhǔn)差（s2）。按公式（2）、
（3）計算瓶間差的變異系數(shù)（CV）。
……………………………………（2）
……………………………………（3）
當(dāng)s1＜s2時，令CV=0
每個濃度下試劑（盒）批內(nèi)瓶間差均應(yīng)不大于5%。
③批間差
用(120±12) U/L的樣本或質(zhì)控樣品分別測試3個不同批號的試劑（盒），每個批號測試3次，分別計算每批3次測定的均值
(i=1,2,3)，按公式（4）、（5）計算相對極差（R）。
………………………………………（4）
……………………………………（5）
式中：
－中的最大值；
－中的最小值。
試劑（盒）批間差相對極差應(yīng)不大于10%。
（8）準(zhǔn)確度
①型式檢驗
相對偏差：
用試劑盒測定用評價常規(guī)方法的參考物質(zhì)或有證參考物質(zhì)或由參考方法定值的高、中、低三個濃度的人源樣品，測定值與標(biāo)示值偏差應(yīng)≤10%。
比對試驗：
用待測試劑盒與申請人選定分析系統(tǒng)（已在國內(nèi)上市）分別檢測不少于40個在檢測范圍內(nèi)的人源樣品，用線性回歸方法計算兩組結(jié)果的相關(guān)系數(shù)r2≥0.95,相對偏差≤10%。
②出廠檢驗
推薦使用型式試驗的方法進行檢測，申請人也可使用經(jīng)內(nèi)部定值的質(zhì)控品進行檢測，測得值與標(biāo)示值偏差不得大于10%。
測定樣本應(yīng)至少包含兩個濃度點，一般應(yīng)按醫(yī)學(xué)決定水平取堿性磷酸酶（ALP）正常值和異常值濃度點。
備注：選用經(jīng)定值的質(zhì)控品進行出廠檢驗，申請人應(yīng)能提供型式試驗方法與出廠檢驗方法等同的研究資料。
（9）穩(wěn)定性
檢測申請人聲稱已到期試劑，產(chǎn)品性能應(yīng)符合空白吸光度、吸光度變化率、分析靈敏度、線性、測量精密度、準(zhǔn)確度要求。
凍干品應(yīng)同時進行復(fù)溶穩(wěn)定性試驗，復(fù)溶后放置到有效期末，產(chǎn)品性能應(yīng)符合空白吸光度、吸光度變化率、分析靈敏度、線性、測量精密度、準(zhǔn)確度要求。
（10）校準(zhǔn)品和質(zhì)控品的性能指標(biāo)（如產(chǎn)品中包含）
應(yīng)至少包含外觀、裝量（干粉試劑可不做）、準(zhǔn)確性、均一性、穩(wěn)定性。凍干型校準(zhǔn)品和質(zhì)控品還應(yīng)檢測批內(nèi)瓶間差和復(fù)溶穩(wěn)定性。
（11）型式檢驗和出廠檢驗要求
型式檢驗應(yīng)包含標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的所有性能指標(biāo)；出廠檢驗應(yīng)包含標(biāo)準(zhǔn)中除穩(wěn)定性、批間差以外的所有性能指標(biāo)。
（四）注冊檢測
首次申請注冊的二類產(chǎn)品應(yīng)該在國家食品藥品監(jiān)督管理部門認(rèn)可的、具有相應(yīng)承檢范圍的醫(yī)療器械檢測機構(gòu)進行至少三個生產(chǎn)批次樣品的注冊檢測。
（五）主要原材料研究資料（如需提供）
應(yīng)提供主要原材料、校準(zhǔn)品（如產(chǎn)品包含）、質(zhì)控品（如產(chǎn)品包含）的選擇、制備、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及驗證有關(guān)的研究資料。
（六）主要生產(chǎn)工藝和反應(yīng)體系的研究資料（如需提供）
應(yīng)包含產(chǎn)品的工藝流程圖和關(guān)鍵控制點、確定反應(yīng)溫度、時間、緩沖體系比較等條件的研究資料、確定樣本和試劑盒組分加樣量的研究資料。
ALP緩沖液通常分為三類：1.惰性型：如碳酸鹽緩沖液和巴比妥緩沖液；2.抑制型：如甘氨酸緩沖液；3.激活型：如AMP、Tris和DEA緩沖液。激活型緩沖液，緩沖物質(zhì)作為酶的一種底物（磷酸?；氖荏w），參與磷酸酰基的移換反應(yīng)，因此能促進酶促反應(yīng)速率。使用最適濃度和激活型緩沖液時，所測的ALP活性要比使用惰性型緩沖液（如碳酸鹽緩沖液）時高2～6倍。DEA的激活作用比AMP的激活作用更強，因此，用不同緩沖液測定ALP活性時，其參考值不同。
ALP活性與血清在反應(yīng)液中所占的體積百分?jǐn)?shù)有關(guān)。當(dāng)血清體積分?jǐn)?shù)從1/26降低到1/51時，測出的酶活性隨之增高；但低于1/51時，酶活性沒有進一步增加。
（七）分析性能評估資料
應(yīng)至少包括具體的研究方法、試驗數(shù)據(jù)、統(tǒng)計方法、研究結(jié)論等。性能評估時應(yīng)將試劑和所選用的校準(zhǔn)品、質(zhì)控品作為一個整體進行評價，評估整個系統(tǒng)的性能是否符合要求。
性能評估應(yīng)至少包括準(zhǔn)確度、精密度、線性范圍、最低檢測限、分析特異性（抗干擾能力）、其他影響檢測的因素等。
1. 準(zhǔn)確度
對測量準(zhǔn)確度的評價依次包括：與國家標(biāo)準(zhǔn)品（和/或國際標(biāo)準(zhǔn)品）的偏差分析、方法學(xué)比對等方法，申請人可根據(jù)實際情況選擇合理方法進行研究。
1.1與國家（國際）標(biāo)準(zhǔn)品的比對研究
如果研究項目有相應(yīng)國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)或國際參考物質(zhì)，則使用國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)或國際參考物質(zhì)進行驗證，計算檢測結(jié)果與靶值的相對偏差。(注:堿性磷酸酶項目目前有國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和國際參考物質(zhì))
1.2方法學(xué)比對
采用參考方法或國內(nèi)/國際普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的已上市同類試劑作為參比方法，與擬申報試劑同時檢測一批病人樣品（至少40例樣本），從測定結(jié)果間的差異了解擬申報試劑與參比方法間的偏倚。如偏倚很小或在允許的誤差范圍內(nèi)，說明兩檢測系統(tǒng)對病人標(biāo)本測定結(jié)果基本相符，對同一份臨床樣本的醫(yī)學(xué)解釋，擬申報試劑與參比方法相比不會產(chǎn)生差異結(jié)果。
在實施方法學(xué)比對前，應(yīng)分別對擬申報試劑和參比試劑進行初步評估，只有在確認(rèn)兩者都分別符合各自相關(guān)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)后方可進行比對試驗。方法學(xué)比對時應(yīng)注意質(zhì)量控制、樣本類型、濃度分布范圍并對結(jié)果進行合理的統(tǒng)計學(xué)分析。其中，濃度分布應(yīng)覆蓋產(chǎn)品的可報告范圍。
2. 精密度
測量精密度的評估應(yīng)至少包括兩個濃度水平的樣本進行，兩個濃度都應(yīng)在試劑盒的測量范圍內(nèi)且有一定的臨床意義，通常選用該檢測指標(biāo)的正常參考值附近和異常高值樣本。
測量精密度的評價方法并無統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)可依，可根據(jù)不同的試劑特征或申請人的研究習(xí)慣進行，前提是必須保證研究的科學(xué)合理性。
3. 線性范圍
建立試劑線性范圍所用的樣本基質(zhì)應(yīng)盡可能與臨床實際檢測的樣本相似，理想的樣本為分析物濃度接近預(yù)期測定上限的混合人血清，且應(yīng)充分考慮多倍稀釋對樣本基質(zhì)的影響。
超出線性范圍的樣本如需稀釋后測定，應(yīng)作相關(guān)研究，明確稀釋液類型及最大可稀釋倍數(shù)，研究過程應(yīng)注意基質(zhì)效應(yīng)影響，必要時應(yīng)提供基質(zhì)效應(yīng)研究有關(guān)的資料。
4. 最低檢測限
最低檢測限的確定常使用同批號試劑對零濃度校準(zhǔn)品（或樣品稀釋液）進行至少20次重復(fù)檢測，平均值加2倍SD（≥95%置信區(qū)間）即試劑的最低檢測限。
5. 分析特異性
應(yīng)明確已知干擾因素對測定結(jié)果的影響：可采用回收實驗對不同濃度的溶血、黃疸、脂血對檢測結(jié)果的影響進行評價，干擾物濃度的分布應(yīng)覆蓋人體生理及病理狀態(tài)下可能出現(xiàn)的物質(zhì)濃度。待評價的堿性磷酸酶樣本濃度至少應(yīng)為高、中、低三個水平，選取線性范圍內(nèi)有臨床代表性意義的濃度。
藥物干擾的研究可根據(jù)需要由申請人選擇是否進行或選擇何種藥物及其濃度進行。
7. 校準(zhǔn)品溯源及質(zhì)控品賦值
校準(zhǔn)品、質(zhì)控品應(yīng)提供詳細(xì)的量值溯源資料，包括定值試驗資料和溯源SOP文件等。應(yīng)參照GB/T 21415—2008《體外診斷醫(yī)療器械 生物樣品中量的測量 校準(zhǔn)品和控制物質(zhì)賦值的計量學(xué)溯源性》的要求，提供企業(yè)（工作）校準(zhǔn)品及試劑盒配套校準(zhǔn)品定值及不確定度計算記錄，提供質(zhì)控品賦值及其靶值范圍確定的記錄。
8. 其他需注意問題
原則上，不同適用機型、不同包裝規(guī)格，應(yīng)分別提交分析性能評估報告；適用機型必須明確具體型號，不能寫系列，且應(yīng)分別進行分析性能評估；不同包裝規(guī)格如選擇典型包裝規(guī)格進行分析性能評估，申請人應(yīng)提交典型包裝規(guī)格可代表其他包裝規(guī)格的依據(jù)或情況說明。不同樣本類型應(yīng)分別進行分析性能評估。
分析性能評估報告應(yīng)明確研究所用臨床樣本來源，明確所用儀器、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品等的產(chǎn)品名稱、生產(chǎn)企業(yè)名稱、注冊證號或注冊證等信息。如分析性能評估研究在醫(yī)療或臨床檢驗機構(gòu)進行，應(yīng)提供合作協(xié)議，明確儀器設(shè)備型號、校準(zhǔn)品質(zhì)控品來源、樣本來源及類型、待評價產(chǎn)品名稱等。
（八）參考值（范圍）確定資料
應(yīng)明確研究采用的樣本來源、詳細(xì)的試驗資料、統(tǒng)計方法等，參考值范圍可參考教科書或文獻資料，但應(yīng)當(dāng)進行驗證。不同性別、不同年齡段、不同樣本類型驗證樣本例數(shù)應(yīng)分別達到120例以上。研究結(jié)論應(yīng)與產(chǎn)品說明書【參考范圍】的相應(yīng)描述保持一致。
（九）穩(wěn)定性研究資料
試劑的穩(wěn)定性通常包括實時穩(wěn)定性、加速穩(wěn)定性、運輸穩(wěn)定性、開瓶（待機）穩(wěn)定性、復(fù)溶穩(wěn)定性等，申請人應(yīng)至少提供實時穩(wěn)定性和開瓶穩(wěn)定性研究資料，干粉試劑同時應(yīng)提供復(fù)溶穩(wěn)定性研究資料（各3個生產(chǎn)批次），加速穩(wěn)定性和運輸穩(wěn)定性資料可在技術(shù)審評過程需要時提供。申請人提供的穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括研究目的、材料和方法、研究結(jié)論等，研究應(yīng)涵蓋產(chǎn)品的所有主要性能指標(biāo)，申請人應(yīng)至少能提供穩(wěn)定性末期的全性能檢測報告。試劑的穩(wěn)定性研究應(yīng)注意選取代表性包裝規(guī)格進行研究（例如：校準(zhǔn)品穩(wěn)定性應(yīng)選取最易受影響的最小裝量），實時穩(wěn)定性研究的時間間隔應(yīng)不大于3個月。
（十）臨床試驗研究
臨床研究資料應(yīng)符合《體外診斷試劑臨床研究技術(shù)指導(dǎo)原則》要求，同時研究資料的形式應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊申報資料形式要求》臨床研究資料有關(guān)的規(guī)定。下面僅對臨床實驗中的基本問題進行闡述。
1. 研究方法
選擇境內(nèi)已批準(zhǔn)上市的性能不低于擬申報產(chǎn)品的同類產(chǎn)品作為參比試劑，采用擬申報產(chǎn)品（以下稱待評試劑）與之進行對比試驗研究，證明本品與已上市產(chǎn)品等效。
2. 臨床研究單位的選擇
應(yīng)選擇至少兩家省級衛(wèi)生醫(yī)療機構(gòu)，臨床研究單位實驗操作人員應(yīng)有足夠的時間熟悉檢測系統(tǒng)的各環(huán)節(jié)（試劑、質(zhì)控及操作程序等），熟悉評價方案。在整個實驗中，待評試劑和參比試劑都應(yīng)處于有效的質(zhì)量控制下，最大限度保證試驗數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性及可重復(fù)性。
3. 臨床試驗方案
臨床試驗實施前，研究人員應(yīng)從流行病學(xué)、統(tǒng)計學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、檢驗醫(yī)學(xué)等多方面考慮，設(shè)計科學(xué)合理的臨床研究方案。各臨床研究機構(gòu)的方案設(shè)置應(yīng)保持一致，且保證在整個臨床試驗過程中遵循預(yù)定的方案實施，不可隨意改動。整個試驗過程應(yīng)在臨床研究機構(gòu)的實驗室內(nèi)并由本實驗室的技術(shù)人員操作完成，申報單位的技術(shù)人員除進行必要的技術(shù)指導(dǎo)外，不得隨意干涉實驗進程，尤其是數(shù)據(jù)收集過程。
試驗方案中應(yīng)確定嚴(yán)格的病例納入/排除標(biāo)準(zhǔn)，任何已經(jīng)入選的病例再被排除出臨床研究都應(yīng)記錄在案并明確說明原因。在試驗操作過程中和判定試驗結(jié)果時應(yīng)采用盲法以保證試驗結(jié)果的客觀性。各研究單位選用的參比試劑及所用機型應(yīng)保持一致，以便進行合理的統(tǒng)計學(xué)分析。另外，待評試劑的樣本類型應(yīng)與產(chǎn)品說明書一致，且不應(yīng)超越參比試劑對樣本類型的檢測要求，如果選擇了參比試劑適用樣本類型以外的樣本，則應(yīng)采用臨床金標(biāo)準(zhǔn)對額外的樣本類型進行驗證。
4. 研究對象選擇
臨床試驗應(yīng)選擇具有特定癥狀/體征人群作為研究對象。企業(yè)在建立病例納入標(biāo)準(zhǔn)時，應(yīng)考慮到不同人群的差異，盡量覆蓋各類適用人群。在進行結(jié)果統(tǒng)計分析時，建議對各類人群分別進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析?？傮w樣本數(shù)不少于200例，異常值樣本數(shù)不少于80例。
血清/血漿應(yīng)明確抗凝劑的要求、存貯條件、可否凍融等要求及避免使用的樣本。實驗中，盡可能使用新鮮樣本，避免貯存。如無法避免使用貯存樣品時，注明貯存條件及時間，在數(shù)據(jù)分析時應(yīng)考慮其影響。
樣本中待測物濃度應(yīng)覆蓋待評試劑線性范圍，且盡可能均勻分布。
5. 統(tǒng)計學(xué)分析
對臨床試驗結(jié)果的統(tǒng)計應(yīng)選擇合適的統(tǒng)計方法，如相關(guān)分析、線性回歸、絕對偏倚/偏差及相對偏倚/偏差分析等。對于對比實驗的等效性研究，最常用是對待評試劑和參比試劑兩組檢測結(jié)果的相關(guān)及線性回歸分析，應(yīng)重點觀察相關(guān)系數(shù)（r值）或判定系數(shù)（R2）、回歸擬合方程（斜率和y軸截距）等指標(biāo)。結(jié)合臨床試驗數(shù)據(jù)的正/偏態(tài)分布情況，建議統(tǒng)計學(xué)負(fù)責(zé)人選擇合理的統(tǒng)計學(xué)方法進行分析，統(tǒng)計分析應(yīng)可以證明兩種方法的檢測結(jié)果無明顯統(tǒng)計學(xué)差異。在臨床研究方案中應(yīng)明確統(tǒng)計檢驗假設(shè)，即評價待評試劑與參比試劑是否等效的標(biāo)準(zhǔn)。
6. 臨床試驗總結(jié)報告撰寫
根據(jù)《體外診斷試劑臨床研究技術(shù)指導(dǎo)原則》的要求，臨床試驗報告應(yīng)該對試驗的整體設(shè)計及各個關(guān)鍵點給予清晰、完整的闡述，應(yīng)該對整個臨床試驗實施過程、結(jié)果分析、結(jié)論等進行條理分明的描述，并應(yīng)包括必要的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和統(tǒng)計分析方法。建議在臨床總結(jié)報告中對以下內(nèi)容進行詳述。
（1）臨床試驗總體設(shè)計及方案描述
①臨床試驗的整體管理情況、臨床研究單位選擇、臨床主要研究人員簡介等基本情況介紹。
②納入/排除標(biāo)準(zhǔn)、不同人群的預(yù)期選擇例數(shù)及標(biāo)準(zhǔn)。
③樣本類型，樣本的收集、處理及保存等。
④統(tǒng)計學(xué)方法、統(tǒng)計軟件、評價統(tǒng)計結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)。
（2）具體的臨床試驗情況
①待評試劑和參比試劑的名稱、批號、有效期及所用機型等信息；
②對各研究單位的病例數(shù)、人群分布情況進行總合，建議以列表或圖示方式給出具體例數(shù)及百分比。
③質(zhì)量控制，試驗人員培訓(xùn)、儀器日常維護、儀器校準(zhǔn)、質(zhì)控品運行情況，對檢測精密度、質(zhì)控品回收（或測量值）、抽查結(jié)果評估。
④具體試驗過程，樣本檢測、數(shù)據(jù)收集、樣本長期保存等。
（3）統(tǒng)計學(xué)分析
①數(shù)據(jù)預(yù)處理、對異常值或離群值的處理、研究過程中是否涉及對方案的修改。
②定量值相關(guān)性和一致性分析
用回歸分析驗證兩種試劑結(jié)果的相關(guān)性，以y=a+bx和R2的形式給出回歸分析的擬合方程，其中：y是待評試劑結(jié)果，x是參比試劑結(jié)果，b是方程斜率，a是y軸截距，R2是判定系數(shù)（通常要求R2≥0.95），同時應(yīng)給出b的95%（或99%）置信區(qū)間。
建議給出待評試劑與參比試劑之間的差值（絕對偏倚/偏差）及比值（相對偏倚/偏差）散點圖并作出95%置信區(qū)間分析。醫(yī)學(xué)決定水平附近相對偏倚/偏差應(yīng)不大于10%。
（4）討論和結(jié)論
對總體結(jié)果進行總結(jié)性描述并簡要分析試驗結(jié)果，對本次臨床研究有無特別說明，最后得出臨床試驗結(jié)論。
三、審查關(guān)注點
（一）關(guān)注產(chǎn)品預(yù)期用途有關(guān)的描述是否與臨床研究結(jié)論一致。臨床研究用參比試劑和第三方確認(rèn)試劑的預(yù)期用途應(yīng)與申請產(chǎn)品預(yù)期用途一致。申報樣本類型應(yīng)在臨床研究中進行驗證。
（二）審查產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)時應(yīng)注意產(chǎn)品應(yīng)符合GB/T 26124-2011《臨床化學(xué)體外診斷試劑（盒）》有關(guān)規(guī)定，準(zhǔn)確度的出廠檢驗如使用質(zhì)控品，應(yīng)經(jīng)過申請人內(nèi)部定值并證明與型式試驗所采用的方法等效。
（三）說明書中預(yù)期用途、儲存條件及有效期、檢驗方法、參考范圍、產(chǎn)品性能指標(biāo)、抗干擾能力等描述應(yīng)分別與臨床研究資料、穩(wěn)定性研究資料、主要生產(chǎn)工藝和反應(yīng)體系研究資料、參考范圍研究資料、分析性能評估資料的研究結(jié)論相一致。
（四）不同性別和年齡段，堿性磷酸酶參考范圍差異較大，申請人應(yīng)分別進行研究。
（五）干粉試劑應(yīng)提供復(fù)溶穩(wěn)定性研究資料并在說明書【儲存條件及有效期】中說明。
四、名詞解釋
1. 準(zhǔn)確度（accuracy）：一個測量值與可接受的參考值間的一致程度。
2. 最低檢測限（Lower detection limit）：樣品中以一定概率可被聲明與零有差異的被測量的最低值。本指導(dǎo)原則中的最低檢測限為區(qū)別于零的不低于95%可信區(qū)間的最低濃度。
3. 分析特異性（analytical Specificity）：測量程序只測量被測量物的能力。用于描述檢測程序在樣本中有其他物質(zhì)存在時只測量被測量物的能力。通常以一個被評估的潛在干擾物清單來描述，并給出在特定醫(yī)學(xué)相關(guān)濃度值水平的分析干擾程度。（潛在干擾物包括干擾物和交叉反應(yīng)物）
4. 線性（linearity）：在給定測量范圍內(nèi)，給出的測量結(jié)果與樣品中實際存在的被測量物的值成比例的能力。線性是描述一個測量系統(tǒng)的測量示值或測量結(jié)果相關(guān)于樣本的賦值符合直線的屬性。
5. 精密度（precision）：在規(guī)定條件下，相互獨立的測試結(jié)果之間的一致程度。精密度的程度是用統(tǒng)計學(xué)方法得到的測量不精密度的數(shù)字形式表示，如標(biāo)準(zhǔn)差（SD）和變異系數(shù)（CV）。
五、參考文獻：
1.《體外診斷試劑注冊管理辦法（試行）》（國食藥監(jiān)械〔2007〕229號）
2.《體外診斷試劑臨床研究技術(shù)指導(dǎo)原則》（國食藥監(jiān)械〔2007〕240號）
3.《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》（國食藥監(jiān)械〔2007〕240號）
4.《關(guān)于含有牛、羊源性材料醫(yī)療器械注冊有關(guān)事宜的公告》（國食藥監(jiān)械〔2006〕407號
5.《全國臨床檢驗操作規(guī)范》（第三版），中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司
6.《臨床化學(xué)常用項目自動分析法》（第三版），遼寧科技出版社
堿性磷酸酶檢測試劑盒
產(chǎn)品注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則編寫說明
一、編寫原則
（一）本指導(dǎo)原則編寫的目的是用于指導(dǎo)和規(guī)范堿性磷酸酶檢測試劑盒產(chǎn)品注冊申報過程中審查人員對注冊材料的技術(shù)審評。
（二）本指導(dǎo)原則旨在讓初次接觸該類產(chǎn)品的注冊審查人員對產(chǎn)品診斷方法或原理、主要組分、主要性能指示、臨床用途等各個方面進行基本了解，同時讓技術(shù)審查人員在產(chǎn)品注冊技術(shù)審評時把握基本的要求尺度，以確保產(chǎn)品的安全、有效。
（三）本指導(dǎo)原則中的堿性磷酸酶檢測試劑（盒）是指基于分光光度法原理對人血清、血漿或其他體液中的堿性磷酸酶活性進行體外定量分析的試劑。
（四）本指導(dǎo)原則中的術(shù)語、定義采用GB/T 26124-2011《臨床化學(xué)體外診斷試劑(盒)》標(biāo)準(zhǔn)的術(shù)語和定義。
二、編寫依據(jù)
（一）《醫(yī)療器械監(jiān)督管理條例》
（二）《醫(yī)療器械注冊管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理局令第16號）
（三）《醫(yī)療器械臨床試驗規(guī)定》（國家食品藥品監(jiān)督管理局令第5號）
（四）《醫(yī)療器械說明書、標(biāo)簽和包裝標(biāo)識管理規(guī)定》（國家食品藥品監(jiān)督管理局令第10號）
（五）《醫(yī)療器械標(biāo)準(zhǔn)管理辦法》（國家藥品監(jiān)督管理局令第31號）
（六）《體外診斷試劑注冊管理辦法（試行）》（國食藥監(jiān)械〔2007〕229號）
（七）《體外診斷試劑臨床研究技術(shù)指導(dǎo)原則》（國食藥監(jiān)械〔2007〕240號）
（八）《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》（國食藥監(jiān)械〔2007〕240號）
（九）國家食品藥品監(jiān)督管理部門發(fā)布的其他規(guī)范性文件
三、重點內(nèi)容說明
（一）指導(dǎo)原則主要根據(jù)體外診斷試劑產(chǎn)品注冊申報資料的要求，借鑒國家食品藥品監(jiān)督管理部門已發(fā)布的相關(guān)產(chǎn)品注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則的體例進行編寫，以便于注冊技術(shù)審評人員理解。
（二）在產(chǎn)品綜述資料中，全面介紹了該類體外診斷試劑產(chǎn)品的預(yù)期用途、產(chǎn)品描述、方法學(xué)特征、生物安全性評價、研究結(jié)果總結(jié)以及同類產(chǎn)品上市情況介紹等內(nèi)容。
（三）本指導(dǎo)原則不涉及產(chǎn)品作用機理的內(nèi)容，主要描述相應(yīng)的診斷方法和原理。
（四）產(chǎn)品應(yīng)適用的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)中給出了現(xiàn)行有效的國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)（包括產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)、基礎(chǔ)標(biāo)準(zhǔn)），以及相應(yīng)的國際標(biāo)準(zhǔn)。
（五）產(chǎn)品的主要性能指標(biāo)中給出了產(chǎn)品需要考慮的各個方面，主要提出共性要求，具體量化指標(biāo)需要參照相關(guān)的國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)和生產(chǎn)商技術(shù)能力予以確定。
四、編寫單位
本指導(dǎo)原則主要由浙江省食品藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械注冊行政審批人員、浙江省藥品認(rèn)證中心注冊技術(shù)審評人員、國家食品藥品監(jiān)督管理局杭州醫(yī)療器械檢測中心檢驗人員、浙江省藥品不良反應(yīng)監(jiān)測中心等有關(guān)人員組織編寫。起草過程中廣泛征求了國家食品藥品監(jiān)督管理總局醫(yī)療器械技術(shù)審評中心、相關(guān)?。ㄊ校┚?、有關(guān)醫(yī)療器械生產(chǎn)企業(yè)和臨床使用單位的意見，以充分利用各方面的信息和資源，綜合考慮指導(dǎo)原則中各個方面的內(nèi)容，盡量保證指導(dǎo)原則可操作性和指導(dǎo)性。
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